亚细胞结构的超高分辨成像研究-上海应用物理研究所.PDFVIP

第 32 卷 第 4 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.32, No.4 2014 年 8 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. August 2014 亚细胞结构的超高分辨成像研究 贾思思 1 梁 乐 1 邓素辉 1,2 侯尚国 1 柳华杰 1,2 黄 庆 1,2 樊春海 1,2 1 （中国科学院上海应用物理研究所物理生物学室嘉定园区 上海 201800 ） 2 （中国科学院上海应用物理研究所光源生物成像中心嘉定园区 上海 201800 ） 摘要 本文介绍了 3 种常用的亚细胞结构成像技术包括荧光超分辨显微成像术、软 X-射线显微镜和三维冷冻 电镜的成像原理，细胞成像应用及所存在的问题。并提出多种显微镜联用的关联显微术由于结合了多种显微 镜的优势，能够提供多方位信息，丰富细胞生物学的研究，有可能给细胞学带来全新的认识。 关键词 亚细胞显微成像，荧光超分辨显微成像术，软 X-射线显微镜，三维冷冻电镜，关联显微术 中图分类号 Q2-33，TL11 DOI: 10.11889/j.1000-3436.2014.rrj.32.040101 作为生命活动的基本单元，细胞无疑是生物学 波长和物镜数值孔径的限制，显微镜所能看清的物 家最重要的研究对象。细胞是一个内部高度有序， 体最小尺寸约为光波长的一半。对于可见光波段， 组织复杂的结构，据空间分布和功能不同，可以分 显微镜只能对亚微米级的结构进行观察。即使是利 成不同细胞器或细胞区域，如细胞核、高尔基体、 用波长较短的紫外光显微镜，极限分辨率提升不足 内质网、线粒体、胞浆和细胞膜等。研究细胞内这 一倍，仍然不优于 200 nm，远远不能满足细胞生物 学中对亚细胞结构的分辨率要求[3] 。为了看清楚这 些亚细胞结构生物体的空间分布、结构、功能及相 些结构，就必须使用突破衍射极限的荧光成像方法 互作用是揭示生命本质的重要途径。例如，蛋白质 或者选择更短波长的光源来提高显微镜的分辨率。 作为生命活动的执行者，构成了细胞中所有的组织 X-射线是一种波长很短的电磁辐射，波长范围在 结构，并执行了所有细胞活动。蛋白质在核糖体中 0.01–10 nm 。另外，电子束的波长也很短，其波长 合成后，经蛋白质分选信号引导被运转到特定的细 与发射电子束的电压平方根成反比，电压越高波长 胞器中，因此蛋白质的胞内定位对于该蛋白质功能 越短。当加速电压高达 30 keV，电子的德布洛意波 分析非常重要[1] 。事实上，这些亚细胞结构大多处 长为 0.007 nm 。因此，当如此短波长的X-射线和电 于纳米尺度，如细胞器核糖体直径在 25 nm，蛋白 子束用于成像时，衍射受限的分辨率可达到几个纳 [2] 。因此，细胞 质分子及复合物则是在 10 nm 以下 米量级。 学的进展很大程度上依赖于显微成像技术的进步。 由于能够提供超高分辨率，荧光超分辨成像技 只有当显微镜分辨率达到这些细胞器相当的尺度 术，基于第三代同步辐射光源的软 X-射线成像技术 时，这些结构才能被分辨出来。然而，光学显微镜