无需手动纯化直接分析合成的寡核苷酸.PDFVIP

应用简报 生物制剂与生物仿制药 无需手动纯化直接分析合成的寡核苷酸 使用 Agilent InfinityLab 二维液相色谱解决方案进行在 线脱盐和离子对反相液相色谱分析 作者 摘要 Sonja Krieger 和 Clarissa Dickhut 由亚磷酰胺化学法合成的寡核苷酸通常使用离子对反相液相色谱 (IP-RPLC) 和阴离 安捷伦科技有限公司 子交换色谱进行分析和纯化。在 IP-RPLC 分析中，阴离子交换纯化馏分的高含盐量 Waldbronn ，Germany 会削弱寡核苷酸参与离子配对的能力。这就需要在 IP-RPLC 分析之前对样品进行脱 盐，这一步骤通常使用离心过滤器手动完成。 本应用简报展示了高盐浓度溶液中寡核苷酸的直接二维液相色谱分析：在第一维 1 2 ( D) 中进行在线脱盐，随后在第二维 ( D) 中进行 IP-RPLC 分析。在该设置中，二维 液相色谱的使用提高了工作流程速度，同时避免了手动的样品前处理过程。 前言 阴离子交换纯化馏分通常含有高浓度的 实验部分 盐，如氯化钠 (NaCl) 或溴化钠 (NaBr)。 在分子生物学和分子诊断中，聚合酶链式 当使用 IP-RPLC 对这些馏分进行分析时， 设备 反应 (PCR) 、基因沉默以及相关技术1 都 高浓度的盐会削弱寡核苷酸参与离子配对 Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱系统 需要标准的和经修饰的合成寡核苷酸。此 的能力，从而导致保留时间变化、峰分裂 包括以下模块： 外，合成寡核苷酸在作为治疗剂治疗各种 以及峰流穿5。为了对阴离子交换纯化馏 • 两台 Agilent 1290 Infinity II 高速泵 疾病（例如癌症和病毒性疾病）方面的重 分进行成功的 IP-RPLC 分析，需要在分 要性日益突显2。寡核苷酸类药物包括反 析前对样品进行脱盐5 ，而这一过程通常 (G7120A) 义寡核苷酸、小干扰 RNA (siRNA) 和适 手动完成。 • Agilent 1290 Infinity II Multisampler 配体。反义寡核苷酸和 siRNA 均通过阻 (G7167B)，配备冷却装置（选件 本应用简报展示了高盐浓度溶液中寡核苷 止 mRNA 翻译从而阻止蛋白质合成。适 #100） 酸的直接二维液相色谱分析，这一盐浓度 配体通过形成适配体-蛋白质复合物，从 与寡核苷酸合成后阴离子交换纯化馏分中 • 两台 Agilent 1290 Infinity II 高容量柱 3 而抑制蛋白质的生物学功能。 的盐浓度相当。二维液相色谱分析的第一 温箱 (G7116B) 2,4 寡核苷酸通常通过亚磷酰胺化学法合成 。 维用于在线脱盐，随后在第二维中进行 •