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发酵性结合酵母菌对重金属吸附能力研究 　　摘要：以海藻酸钠和聚乙烯醇作为包埋剂对发酵性结合酵母菌进行固定化，采用单一变量法研究溶液的pH值、金属离子初始浓度、菌体浓度、吸附时间、吸附温度5种因素对固定化酵母菌吸附Pb2+和Zn2+离子的影响。结果表明，发酵性结合酵母菌对Pb2+、Zn2+吸附的最佳条件是：pH值4.0，金属离子初始浓度0.25μg/mL，酵母菌浓度2.0g/L，吸附时间15min，吸附温度30℃。发酵性结合酵母菌对Pb2+和Zn2+有较好的吸附能力，是良好的生物吸附剂。 　　关键词：发酵性结合酵母菌；吸附；重金属；Pb2+；Zn2+ 　　中图分类号：X703文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0398-03 　　重金属是造成水体污染的一类有毒物质[1]。由于含重金属的工业废水的排放量不断增加，这些废水被排入水体和土壤中，会对环境和人类的健康造成极大的威胁，因此，必须处理后再进行排放[2]。生物吸附法有利于解决这一难题，利用微生物吸附废水中的重金属在投资、运行、操作管理和重金属回收、水回用等方面优越于传统的治理方法[3]。目前，能够作为生物吸附剂的微生物有细菌，真菌，藻类[4]，由于酵母菌广泛应用于食品饮料工业，廉价易得且安全，有利于生物吸附的工业化应用[5]，所以酵母菌是生物吸附剂的首选。但有关发酵性结合酵母菌对重金属吸收能力的研究未见报道。本试验以从宋河酒曲中筛选出来的发酵性结合酵母菌为试验菌种，研究固定化发酵性结合酵母菌对Pb2+、Zn2+离子吸附的最佳条件，为利用该吸附工业废水中重金属菌种的开发和应用提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1菌种发酵性结合酵母菌菌种A27，周口师范学院发酵工程实验室提供。 　　1.1.2主要仪器 　　恒温振荡器HZQ-X300，上海一恒科学仪器有限公司产品；型电热鼓风干燥箱101-1，北京科伟永兴仪器有限公司产品；电子天平AL204，梅特勒托利多仪器（上海）有限公司产品；pH值计EL20，梅特勒托利多仪器（上海）有限公司产品；系列生化培养箱THZ-98AB，昆山一恒仪器有限公司产品；超净工作台JJ2010-04-108，苏州市金净净化设备科技有限公司；紫外可见分光光度计UV-5100，上海元析仪器有限公司。 　　1.1.3主要试剂硝酸铅、氯化锌、氯化钙、硼酸、海藻酸钠、聚乙烯醇（PVA）、双硫腙、四氯化碳、硫代硫酸钠、甲基红、氨水、乙酸、四氯化碳、酚红、三氯甲烷均为分析纯。 　　1.1.4溶液的配制锌标准溶液：称取0.2092g氯化锌移入100mL的容量瓶，加水稀释至刻度，每1mL相当于1mgZn2+。 　　锌标准使用液[6]：取1.0mL的锌标准溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，每1mL溶液相当于10μgZn2+。 　　铅标准溶液：称取0.1598g硝酸铅移入100mL的容量瓶，加水稀释至刻度，每1mL相当于1mgPb2+。 　　铅标准使用液：取1.0mL的铅标准溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，每1mL溶液相当于10μgPb2+。 　　25%硫代硫酸钠：称取25g硫代硫酸钠，溶解于100mL蒸馏水中。 　　0.1%甲基红：称取0.1g甲基红，用60mL95%乙醇溶解，加蒸馏水定容至100mL。 　　乙酸溶液：取10mL冰乙酸溶于70mL蒸馏水中。 　　0.1%双硫腙四氯化碳溶液：称取0.10g双硫腙，用四氯化碳溶解至100mL，倒入棕色瓶，置于冰箱中保存。临用前，吸取适量双硫腙四氯化碳溶液，加四氯化碳稀释30倍，即可使用。 　　双硫腙三氯甲烷溶液：称取100mg双硫腙，溶于1000mL三氯甲烷中，此溶液每1mL含100μg双硫腙，保存于冰箱备用。临用前取适量上述双硫腙三氯甲烷溶液，置50mL容量瓶中，用三氯甲烷稀释定容。 　　0.1%酚红指示剂：取酚红0.1g，加入氢氧化钠溶液2.82mL使其溶解，再加入蒸馏水至100mL。 　　乙酸-乙酸钠缓冲溶液：称取68g乙酸钠，用蒸馏水溶解至250mL。冰乙酸取31mL，加蒸馏水至250mL，以上二者混合。 　　1.1.5培养基 　　马铃薯培养基[7]：将马铃薯洗净去皮，切块，称取600g于干净的大烧杯中，加入1000mL蒸馏水煮30min，经8～12层纱布过滤，取马铃薯过滤液，加入60g葡萄糖，溶解后用蒸馏水稀释至1200mL，分装于250mL三角瓶中，在121℃条件下灭菌20min，保存备用。 　　1.2方法 　　1.2.1酵母菌干粉的制备 　　在无菌操作台中，挑取3环平板培养基中的发酵性结合酵母菌A10，接种到灭菌的马铃薯培养基中，在振荡培养箱中温度为28℃、转速为150r/min条件下振荡培养24h。将该培养