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发状根在大豆基因工程中应用研究进展 　　摘 要：发状根农杆菌Ri质粒侵染植物后诱导大量发状根发生，由此发展起来的遗传转化体系已经成为一项非常重要的转基因技术，并被应用到生命科学的多个领域。大豆是重要的粮食作物和油料作物，也是目前转基因种植面积最大的作物。现有的大豆子叶节、幼胚、胚尖遗传转化体系转化效率低、周期长，而发状根遗传转化体系具有转化效率高、周期短等优点，因此发状根在大豆基因工程研究中被广泛应用。本文综述了近年来发状根在大豆基因工程中的应用研究进展。 　　关键词：发状根；大豆；基因工程；分子育种 　　中图分类号：Q-1 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170206001 　　大豆在我国与稻谷、玉米和小麦共同构成了四大粮食作物，同时大豆在农业生产和食物消费系统中占有重要的地位和作用[1]。近年，全球转基因大豆的种植面积已是转基因品种种植面积最大的作物。可见，转基因技术已成为大豆新品种培育的重要手段。目前应用的大豆遗传转化技术主要是以子叶节、幼胚、胚尖作为外植体，转化后诱导大豆再生植株。但是，这些方法周期较长且转化效率低，不利于快速鉴定相关基因在大豆育种中的应用潜力。发状根农杆菌介导的大豆遗传转化体系，因其周期短、转化效率高且不易产生变异等优点，越来越受到重视。本文就发状根转化体系在大豆基因工程中的应用研究做一综述，展望该项技术的应用前景，为大豆育种工作者们提供一些有用信息。 　　1 发状根遗传转化体系概述 　　发状根农杆菌中含有Ri质粒，与根癌农杆菌中的Ti质粒类似，上面含有T-DNA区，侵染植物后，T-DNA区能够转移并整合进植物的基因组中。发状根农杆菌转化侵染植物后，在侵染部位或四周产生大量的发状根，而且所产生的发状根能够合成该植物特征的次生代谢产物，因此发状根可作为植物次生代谢产物的生物反应器。另外，通过单细胞分化而来的发状根变异性低，能够稳定遗传，且更容易获得再生的转化植株，因此该项技术自产生以来迅速被应用到基因功能的研究和品种改良等。据统计有200多种植物[2]可被诱导出发状根，大多集中在茄科、菊科、十字花科、旋花科、伞形科、豆科、石竹科和蓼科等草本植物中，而木本植物较少有成功转化的报道[3]。这就意味着，发状根遗传转化技术在植物界，尤其是在草本植物中，具有广阔的应用前景。 　　发状根诱导培养过程并不复杂。发状根农杆菌侵染植物组织创伤部位（叶片、茎段、叶柄、根切片等）和发状根农杆菌共培养，其Ri 质粒中的T-DNA区转移并整合到植物基因组上。经过一段时间培养，植物组织的创伤部位诱导产生发状根。接下来按一定长度剪下发状根，转移到固体培养基上继代培养多次，以消除共培养残留的农杆菌。把每个发状根系转移到液体培养基中培养，或者进一步诱导再生出转化植株。通常认为创伤组织上，每个萌发的发状根代表一个发状根系[4]。 　　2 发状根在大豆基因工程中的应用 　　2.1 大豆发状根用于启动子的功能研究 　　大豆发状根转化体系具有周期短、转化效率?{、单细胞分化的发状根变异性低等优点。通过启动子在大豆发状根中可以快速表达的特性，揭示其在大豆自身中的表达活性。植物启动子的研究有助于了解基因转录调控表达模式及其调控机制，并应用于基因工程中提高或改进外源目的基因的表达。而根特异表达基因的获得，是进一步研究其启动子如何进行基因组织特异表达的基础。现有报道，通过抗大豆孢囊线虫（SCN）诱导合成启动子，驱动绿色荧光蛋白基因（GFP）在发状根中表达，验证了该合成启动子是诱导型启动子[5]。通过大豆水通道蛋白基因（GmTIPp）启动子及其缺失片段的启动子调控报告基因（GUS）在发状根中表达，进一步了解GmTIPp启动子的特异核心序列区域 [6]。发现在发状根中接种根瘤后，大豆胞外复合物（GmExo70J7、GmExo70J9）启动子的活性受到显著的抑制[7]。大豆硫转运蛋白基因（GmSULTR）启动子截取部分片段序列作为启动子，具有驱动下游GUS基因在发状根中表达的功能，而且在根毛、根表皮和中柱内表达且启动活性比CaMV35S启动子的启动活性弱[8]。在大豆发状根中比较玄参花叶病毒（FMV）启动子，木薯叶脉花叶病毒（CsVMV）启动子，草莓镶脉病毒（SVBV2）启动子，35S和E35S启动子驱动GUS基因的表达活性，证明FMV启动子在根中是强表达[9]。在大豆发状根中验证大豆疫霉诱导性基因（GmaPPO12、 GmaPR1）启动子功能，可用于转基因植物，增强对疫霉病病原体的抗性[10]。在大豆发状根中通过GUS活性测定，得到改造的乙醇脱氢酶基因（Adh）启动子可由缺氧诱导，但低温，创伤或ABA不能诱导。得到的Adh启动子可用于转基因实验中缺氧诱导的表达，以改善植物对水淹或缺氧胁迫的耐受性[11]。在大