卷象科昆虫无损形态DNA提取方法.docVIP

卷象科昆虫无损形态DNA提取方法 　　A new method used for isolating attelabid (Coleoptera) DNA without distroying mo rphological feature. XIE Meng1, 2, HOU Qing-Bai1, 2, LIANG Xing-Cai1**(1.Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, Kunming 6 50223， China; 2.Graduate University of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049， China) 　　Abstract To isolate total DNA isolation is the first step in all molecular experiments. I n the molecular entomology works, regular methods for isolating DNA cant reserv e entire morphological characters of insects. So, obviously it is not available for the scarce and small insects. We used leaf-rolling weevils (Coleoptera: Att elabidae) as materials and improved the isolating method. We removed the entire abdomen and took back the ossific ventral shield after digested the musculature. 　　This method can isolate total DNA and reserve all the morphilogical feature and insect genital at the same time. 　　Key words Coleoptera, attelabidae, DNA isolation, genital, morphologic character 　　 　　摘 要 提取DNA是所有分子生物学实验的第一步，但在昆虫分子生物学研究中，常规提取总DNA的方 法不能保留昆虫所有的形态特征。显然，这不适用于对于体形较小的珍稀标本。以鞘翅 目卷象科（Coleoptera：Attelabidae）昆虫为实验材料，提供了一种新的取材方法，取下 整个腹部，消化其肌肉组织后收回骨化腹板。该方法可在提取昆虫总DNA的同时保存全部外 形特征及其生殖器。 　　关键词 鞘翅目, 卷象科, DNA提取, 生殖器, 形态特征 　　 　　20世纪80年代PCR技术的出现使DNA序列数据被越来越广泛的应用于生物各个类群系统发育学 的研究中，昆虫的分子系统发育学研究亦在各个阶元普遍展开。鞘翅目作为昆虫纲中最大的 一个目，在系统发育学研究当中存在着很多分歧和问题，分子技术给持不同观点的人提供 了更多更有力的证据。然而，根据目前的报道来看，在鞘翅目内开展分子生物学研究时，其 形态性状分布比较密集的头部（包括触角）、胸部、腹部或者足常常作为提取DNA的材料被 研磨，从而使有用的形态特征消失殆尽。如：对金龟科Scarabaeidae选取头部和胸部 ［1］，对豆象科Bruchidae选取整个身体［2］，对隐翅虫科Staphylinid ae选取身体的前半部分［3］，对葬甲科（Silphidae）选取腿和触角或整个虫体 ［4］,对拟步甲科Tenebrionidae选取后腿［5］,对叶甲科Chrysomelidae 选取整体或者头部及胸部［6］，对象虫选取腹部体壁［7］等等。这种取材 方法无法保留用于分子实验所需标本全部的形态特征，不能应用于稀缺标本。而数量稀少， 形态特异的标本又往往在系统发育学研究当中有重要价值。对于体形较大的甲虫，尚可选取 一侧的足和触角作为分子试验材料，剩余部分用于形态学研究，但个体中小型的甲虫用这样 的取材方法仍存在一定难度。 　　卷象科是鞘翅目中形体小到中型的一个类群，以前多通过形态性状建立系统发育关系［ 8］，和其它类群一样，其雄性生殖器的形态性状特征在这些研究中被广泛应用［9， 10］。但目前鲜有结合分子生物学证据对卷象科系统发育研究的报道。无疑，结合来自于 分子生物学与形态学（其中包括生殖器的形态学）两方面的特征共同分析会得到更令人信服 的结果，但是