参麦注射液关节内注射治疗家兔膝骨关节炎实验研究.docVIP

参麦注射液关节内注射治疗家兔膝骨关节炎实验研究 　　【摘要】目的：观察关节内注射参麦注射液治疗家兔膝骨关节炎的疗效。方法：以40只健康SPF级新西兰家兔为研究对象，随机分为正常对照组、模型组、参麦注射液组（以下称参麦组）、利多卡因组和参麦注射液+利多卡因组（以下称参麦+利多组）5组，每组8只，除正常对照组外，其余4组采用木瓜蛋白酶所致兔膝骨关节炎模型。正常对照组、模型组分别予关节内注射0.4 mL的注射用生理盐水，参麦组注射0.4 mL参麦注射液，利多卡因组注射0.4 mL利多卡因，参麦+利多组注射二者混合液0.4 mL，每周1次，连续8次，观察家兔步态、膝关节周径及关节液中炎症因子浓度。结果：造模后2周家兔步态除正常对照组外，其余4组造模前后步态均有明显变化（P=0.018 0.05），利多卡因组明显增大，差异有统计学意义（P = 0.029 0.05）；局部炎症因子水平结果与正常对照组比较，模型组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高，差异有统计学意义（P = 0.023，0.001，0.014 0.05），利多卡因组明显升高，差异有统计学意义（P = 0.031，0.008，0.025 0.05）。结论：关节内注射参麦注射液能明显改善模型兔步态，消除膝关节肿胀，同时可以降低关节液的炎症因子如IL-1β、IL-6、TNF-α水平。 　　【关键词】 骨关节炎，膝；参麦注射液；关节内注射治疗；实验研究；家兔；实验研究 　　退行性膝关节病（degenerative osteoarthritis， DOA）是临床上的常见病、多发病之一，其特点为关节软骨退化、变性和坏死，并在软骨下骨及关节周围有新骨形成[1-3]。DOA多发于中老年人，随着年龄的增长，加之长期负重或过度使用，导致关节软骨的退变。关节软骨、骨骼的退变与机体其他组织（如心血管）退变有相似性，研究者从参麦注射液有营养心肌细胞的作用得到启示[1，6]，利用膝关节腔注射给药的方式，以达到直接营养关节软骨的目的。为探讨参麦注射液防治膝关节退行性疾病的作用机制及局部用药的安全性，探索防治DOA新思路，笔者于2011年12月开展本研究，现总结报道如下。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 健康SPF级新西兰家兔40只，由广东省医学动物实验中心提供，实验动物合格证号SCXK（粤）2011-0062。 　　1.2 实验药品及试剂 参麦注射液（四川三精升和制药有限公司生产，国药准字生产批号110914）每支10 mL；利多卡因注射液（江苏济川制药有限公司生产，生产批号110315）每支5 mL； 　　木瓜蛋白酶（活力200万U，天津诺奥科技发展有限公司提供）；IL-1β、IL-6、TNF（广州展晨生物科技有限公司，生产批号CK-E30015）。 　　2 方 法 　　2.1 造模与分组 40只家兔适应性喂养1周后，随机取8只为正常对照组，给予关节腔内注射0.5 mL 　　EDTANa2磷酸盐缓冲液，其余家兔采用木瓜蛋白酶所致兔骨关节炎造模：将NaCl 0.4 g、NaOH 0.01 g、Na2HPO4 0.358 g及KH2PO4 0.024 g溶解在8 mL双蒸水中，加入NaOH调节pH值至8.0，加入EDTANa2 7.44 mg，震荡溶解，再加入木瓜蛋白酶0.16 g溶解，测量液体pH值后，加入HCL调整pH值到6.5，以双蒸水定容至10 mL，4 ℃低温保存备用。将上述备用的1.60%木瓜蛋白酶溶液0.5 mL 　　注入动物双侧膝关节腔内，第l，3，7天各注射1次。根据临床上超疲劳容易提前出现骨关节炎的发病特点，每日强迫家兔活动30 min，2周后即得到稳定的膝骨关节炎模型。造模成功后随机分为模型组、参麦组、利多卡因组、参麦+利多组4组，每组8只。 　　2.2 给药方法 造模2周后，参麦组关节腔注射参麦注射液0.4 mL（2 mg?kg-1）、利多卡因组关节腔注射利多卡因注射液0.4 mL（2 mg?kg-1）和参麦+利多组注射0.4 mL参麦注射液和利多卡因注射液混合液，正常对照组和模型组均关节腔内注射0.4 mL的注射用生理盐水，每周1次，连续8次，于未次注射给药后2 h，取血，不加抗凝剂，然后处死家兔。 　　2.3 观察指标 　　2.3.1 家兔步态的评价 分别于造模前后、给药期、末次给药2 h，每日观察，每4周进行1次步态评价，步态分级按Coderre的方法，即0级：正常行走；I级：轻微跛行，受试下肢略有弯曲；Ⅱ级：中度跛行，受试下肢刚触及地面；Ⅲ级：重度跛行，受试下肢略离开地面，后足着地行走。 　　2.3.2 膝关节周长测量 分别于造模前后、给药期、末次给药2 h，麻醉，用软尺测量各组动物膝关节部位周长，