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卷烟烟气水溶液及绿茶对斑马鱼毒性作用 　　摘要：以斑马鱼（Danio rerio）为试验材料，采用半静态法在室内测定了卷烟烟气水溶液的急性毒性并初步探讨了绿茶水对其的减毒作用。结果表明，卷烟烟气水溶液对斑马鱼的24、48、72、96 h的LC50分别为3.6%、3.2%、3.1%、3.0%。3%的绿茶水对3.3%的卷烟烟气水溶液有减毒作用，9%和15%的绿茶水无该作用，且增强了3.3%卷烟烟气水溶液对斑马鱼的致死作用。卷烟烟气水溶液对斑马鱼有毒性致死影响，且该影响随卷烟烟气水溶液浓度的增大和作用时间的延长而增强，绿茶水对降低卷烟烟气毒害具有明显作用，但高浓度绿茶水可导致斑马鱼死亡。 　　关键词：卷烟烟气水溶液（WSCCS）；绿茶；斑马鱼（Danio rerio）；毒性 　　中图分类号：S965.8；X503.225 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5483-04 　　卷烟烟支主要是由烟草、添加剂、卷烟纸、滤嘴等构成的，其中最重要的是烟草。当烟支在高温条件下燃烧（或燃吸）时，内部化学成分发生一系列复杂变化从而形成卷烟烟气。烟草作为一种天然材料，在燃烧过程中由于温度和供氧量的不同，其燃烧机制不同，产生烟气的化学成分也不同。烟气中有数千种化合物，大约仅有1/3的化合物直接来自烟草，其余则是燃烧过程中产生的化合物，许多成分含量极微[1]，包括多种氧化剂、自由基及半醌基，这些化学物质打破了机体氧化抗氧化的平衡并能在肺中导致细胞内的损伤[2]。 　　斑马鱼（Danio rerio），又名斑马担尼鱼（Brachydanio rerio）、蓝条鱼、花条鱼、印度鱼、印度斑马鱼、蓝斑马鱼和黑斑刺?鱼等，属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于印度东部、巴基斯坦、缅甸以及孟加拉国的小溪、稻田及恒河中游地区，是一种小型热带鱼[3]。斑马鱼中存在许多与人类疾病相关的基因，且在蛋白质水平上，其关键部位的同源性几乎是100%，所以可用斑马鱼来模拟人类疾病，这使其迅速成为脊椎动物中最适于做发育生物学和遗传学研究的模式生物，同时也是最好的毒理模式脊椎动物[4]。20世纪70年代末，斑马鱼在国外开始被用于急性毒性试验研究[5]；90年代初，斑马鱼开始用于急、慢性联合毒性试验[6]。斑马鱼是国际标准化组织（ISO）推荐使用的鱼类毒性实验动物，是一种敏感的水生模式生物，对多种有毒化学物质或环境污染物敏感，被国内外广泛用于多种有毒化学物质的生态风险评估[7-10]。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 供试卷烟 龙凤呈祥，川渝中烟工业有限责任公司出品，焦油量 10 mg，烟气一氧化碳11 mg，烟气碱烟量1.0 mg。 　　1.1.2 供试鱼 供试斑马鱼采购于成都青石桥花鸟鱼市场，大小一致，体长（30±5） mm，体重（0.3±0.1） g。试验前在实验室驯养7 d以上，驯养期间死亡率不得超过10%，试验前1 d停止喂食，试验期间也不喂食。 　　1.1.3 试验用水 经暴晒24 h去氯后的自来水[11]，pH 6.5～7.5；水曝气至溶解氧浓度达到空气饱和值（ASV）[12]。 　　1.2 方法 　　1.2.1 卷烟烟气水溶液制备 根据参考文献[13]收集方式，每400 mL清水抽吸8支卷烟，重复操作收集足够用于试验的卷烟烟气水溶液作为母液Ⅰ。 　　1.2.2 卷烟烟气水溶液对斑马鱼的毒性作用 试验在水盆中进行，设5个浓度梯度，每个浓度梯度设置3次重复，如表1所示。每盆中所盛试液总体积2 000 mL，保证1.5 g鱼每升水的要求[12]。按照该方案将母液Ⅰ稀释为所需要的浓度和体积，用玻璃棒充分搅拌，使卷烟烟气水溶液分布均匀，然后每个盆中放入10条斑马鱼。在12、24、48、72、96 h时检查记录斑马鱼的死亡情况，并计算死亡率。试验过程中用增氧机增氧并且每12 h更换试液。试验鱼中毒后俯卧或侧卧于盆底鳃盖停止活动，用玻璃棒或小镊子轻轻刺激尾部，5 min内无反应即可以确定为个体死亡[14]。 　　1.2.3 绿茶水溶液对斑马鱼的影响 称取1.0 g绿茶溶解于250 mL烧沸的清水中，浸泡30 min，用玻璃棒轻轻搅拌，然后冷却至室温，作为母液Ⅱ备用。采取相同的方法制备足够试验所需的量，按照表2方案设置9个体积分数（3%、5%、7%、9%、11%、13%、15%、17%、19%），每盆中放入5条斑马鱼，按照上述试验方法记录数据。 　　1.2.4 卷烟烟气水溶液和绿茶的互作效应 根据前两次试验结果，设计了卷烟烟气水溶液和绿茶的互作效应试验。试验方法同上，每盆放5条斑马鱼。设A、B、C 3个混合液处理和去离子水对照（C