基因工程二轮复习-优秀综述.pptVIP

基因工程二轮复习 * 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 目的基因 目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 获取目的基因常用方法 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 人工合成 基因组文库 部分基因文库（cDNA文库） ① 概念 ②原理 ③条件 ④方式 ⑤结果 ⑥过程 a、DNA变性 b、退火 c、延伸 PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 2n 考点1　基因工程相关知识考查 1．基因工程的基本工具的比较 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用 部位 携带目的基因进入受体细胞 拼接DNA片段，形成重组DNA 切割目的基因和载体 作用 载体 DNA连接酶 限制酶 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 常用 类型 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 (2)有多个限制酶切割位点 (3)具有特殊的标记基因 (1)E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端 (2)T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端 (1)识别特定的核苷酸序列 (2)在特定位点上切割 作用 特点 (条件) 3.PCR技术与DNA复制的比较 ①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成 ②原料：均为四种脱氧核苷酸(即dCTP、dATP、dGTP和dTTP) ③酶：均需要DNA聚合酶进行催化 ④引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 联系 DNA片段或基因 DNA分子 合成的对象 需控制温度，在较高温度下进行 细胞内温和条件 温度条件 耐热的DNA聚合酶(Taq酶) DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等 酶 细胞外(主要在PCR扩增仪内) 细胞内(主要在细胞核内) 场所 区别 PCR技术 DNA复制 二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心 1、目的： 所需物质： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 2、基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们各自的作用是什么? 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 三将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 2.将目的基因导入受体细胞中的方法的比较 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 目的基因表达载体提纯提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 Ca2＋处理法 显微注射法 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 生物种类 *