形成了一个重组DNA分子.PPTVIP

大肠杆菌的质粒常含有抗药基因，如抗四环素的标记基因。 质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 （二）基因操作的工具 基因的运载工具——运载体： 四个基本步骤： （三）基因操作的基本步骤 4）目的基因的检测和表达 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 步骤一：提取目的基因 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 步骤二：目的基因与运载体结合 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 所有受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？ 在全部受体细胞中，真正能摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。 所以必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入目的基因进行检测。 检测一般依据的原理是什么？ 依据受体细胞是否具有质粒中标记基因所控制的某种性状。 步骤三：目的基因导入受体细胞 受体细胞摄入重组DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 有些受体细胞即使摄入重组DNA分子但目的基因并不一定能完成表达。 那么，受体细胞摄入重组DNA分子后，目的基因完成表达的标志是什么？ 受体细胞必须表现出目的基因所控制的特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 步骤四：目的基因的检测和鉴定 基因工程及其应用 第 六章 第二节 基因工程的基本内容 主要内容 1、什么是基因工程？ 2、基因工程的原理是什么？ 3、基因工程有哪些应用？ 4、转基因食品安全吗？ 又称基因拼接技术,或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 （一）基因工程概念 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 （一）基因工程概念 培育转基因大肠杆菌的简要过程： 你认为上述培育转基因大肠杆菌的关键步骤有哪些？ 普通大肠杆菌 (不能分泌胰岛素) 人体组织细胞 提取 胰岛素基因 与运载体DNA拼接 导入 大肠杆菌 (含胰岛素基因) 转基因大肠杆菌(能分泌胰岛素) 培育转基因大肠杆菌的关键步骤： 1.ONE 胰岛素基因从人体细胞内提取出来 2.TWO 胰岛素基因与运载体DNA连接 3.THREE 胰岛素基因导入受体细胞(大肠杆菌) 基因的“剪刀” 基因的“针线” 基因的运载体 （二）基因操作的工具 基因的剪刀——DNA限制性核酸内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外源的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名DNA限制性核酸内切酶 基因的剪刀——限制性核酸内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 作用特点： 举 例： 特异性 识别特定的核苷酸序列 在特定的切点上切割 大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 限制酶 （二）基因操作的工具 被限制酶切开的两段DNA的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫做黏性末端。 （二）基因操作的工具 基因的剪刀——限制性核酸内切酶（简称限制酶） CTTCAT G AATTCCCTAA GAAGTCCTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 练习使用EcoRI 剪切目的基因 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 基因的针线：DNA连接酶