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鸡群免疫抑制性疾病的分子生物学检测技术和防控现状 鸡群免疫抑制性疾病 的分子生物学检测技术和防控现状 王红雷.赵桂省 (1.山东省济南市长清区牧政执法大队250300;2.济南市畜禽良种繁育中心250306) 中图分类号:$858.315.3文献标识码:A文章编号:1673—1085(2009)05-0045—04 从病料中直接分离病毒和采用传统的血清学方 法很难满足生产和做大规模流行病学调查需要,而 某些肿瘤免疫抑制病在临床表现,大体病变上很相 似,传统的鉴别方法不易将它们准确,快速鉴别开 来.针对鸡群当中多重感染现象较多,同时做大规模 的流行病学调查工作量较大,寻找一些准确,灵敏, 快速的分子生物学诊断方法就显的十分重要. 1分子生物学检测技术现状 1.1IBD(传染性法氏囊病)的检测近年来,随着 人们对IBDV分子变异机制,IBDV复制及其调控 机理的深入研究,许多新的,快速有效的诊断和检 测IBDV的方法被建立并用于临床.朱红【?】利用抗 IBDV的单克隆抗体建立了夹心阻断ELISA来检 查血清抗体,并与琼脂扩散(AGP)和病毒中和(VN) 试验进行比较.结果表明.夹心ELISA的敏感性超 过VN试验.更远胜于AGP试验.郭军庆(21等研制 出IBD单抗快速诊断试剂盒,该试剂盒使用程序简 便,能在10～15min内做出准确诊断.陈士友[3],王 永山【4】用DIG标记探针杂交检测IBDV,马兴树应 用火箭免疫电泳技术诊断IBD,陈红英用反转录一 套式PCR方法检测IBDV均取得了满意效果. 目前.要测定免疫鸡群是否感染vvIBDV非常 困难.良好的免疫接种与因免疫失败而发生的早期 田间感染很难区分.但可通过基因工程手段,对疫 苗株进行修饰改造,使其抗原结构组成能与所有已 知的田间毒株相区别. 1.2MDV(马立克氏病毒)的检测MDV的检测 方法现在较常用的有荧光抗体(FA)法,AGP试验, 酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应(PCR)技术,核 酸探针等.PCR技术具有快速,敏感,特异的特点, 收稿日期:2009—02—13 已设计出用于扩增MDV1特异的132bp重复序列 的正向引物,反向引物,它可用于鉴别致弱株和野 毒株以及肿瘤中的病毒DNA.另外以DNA探针通 过DNA点杂交的方法可用于检测羽尖以及内脏肿 瘤提取物MDV的DNA. 1.3ALV(禽白血病病毒)的检测目前已建立了 针对于ALV—J(J亚群禽白血病病毒)的特异性PCR 检测方法.可用来检测存在于肿瘤及感染组织中和 细胞培养物上的前病毒DNA.E.J.Smith等所用的 PCR引物是由前病毒DNA3端的E序列到5端 的LTR的末端组成,用于扩增不常见的E成分和 LTR高度保守的独特5区,结果表明,该PCR系 统对ALv—J前病毒是特异,敏感的. 1.4REV(网状内皮组织增生病病毒)的检测由 于抗体出现的频率和持续的时间很不一致,采用间 接免疫荧光,病毒中和试验,琼脂扩散试验,酶免疫 测定和中和试验从感染禽的血清或卵黄可检测到 特异性抗体.抗体检测试验对于确证出口的SPF种 鸡群或繁殖的后代无病毒感染是非常重要的. 1.5CIAV(鸡传染性贫血病病毒)的检测随着分 子生物学新方法的不断出现,核酸探针技术,PCR 技术及第二代ELISA技术已应用于CIAV特异性 检测.Todd等建立了一种用32P标记的CIAV特异 DNA探针.用于检测感染雏鸡组织内CIAV特异 DNA:Noteborn等采用同位素标记克隆化的CIAV 基因组作探针进行杂交实验.检测出不同毒株感染 细胞中双链复制型及单链环状CIAV基因组.随后 Notebom等用非放射性的地高辛标记探针,成功从 感染CIAV的肉鸡血样中检测到该病毒.用于检测 CIAV的PCR技术可以检测到高背景下的CIAV. 核酸斑点杂交方法具有敏感,特异的优点,并 且一次可以检测的样品数量较大,是CIAV检测的 好方法.1996年,崔治中和刘岳龙,段玉友等人在 没有CAV特异性诊断试剂的条件下【5】,通过聚合酶 链式反应扩增鸡CIAVDNA特定片段,将此PCR 产物用Digoxigenin标记后作为探针进行斑点杂 交,以此检测CIAV并作流行病学调查获得成功, 得出结论和崔现兰等【6J用间接免疫荧光法检测各地 送检血清进行比较,发现两者阳性几率都为80%. 1.6REOV(呼肠孤病毒)的检测 1.6.1反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)谢芝勋等 (1997)根据S1133S1基因序列网,对s1保守区设计 了一对引物(MK87,MK88),532bp.用此引物对6株 标准株和23株野毒株RNA抽提物的cDNA扩增. 结果在凝胶电泳中出现了预期长度为532bp的电 泳带,其它病毒和细菌对照为阴性.说明此引物对 ARV是特异