烟草及烟草制品烟碱降烟碱新烟碱麦斯明和假木-中国烟草标准化.DOCVIP

PAGE PAGE 1 烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定 气相色谱-质谱联用法 研究报告 《烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定气相色谱-质谱联用法》 标准研究项目组 2010年6月 烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定 气相色谱-质谱联用法 研究报告 1、概述 烟草生物碱是烟草和卷烟烟气中一类最重要的化学成分之一，其组成和含量对烟草感官品质和安全性具有重要影响。烟草中生物碱通常是与无机酸(硫酸，磷酸，硫氰酸)或有机酸(苹果酸，柠檬酸，草酸，醋酸，丙酸等)结合成盐而存在于植物中，只有少数生物碱以游离碱的形式存在。除烟碱外，烟草中主要的生物碱还包括降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱[1]。它们的结构式如下所示： 烟碱 降烟碱 麦斯明 假木贼碱 新烟碱 研究表明，烟草中烟碱可直接刺激人体中枢神经，产生生理反应；降烟碱对卷烟吸味有负面影响；麦斯明有一种老鼠气味，严重影响卷烟产品的吸味；假木贼碱的毒性稍稍低于烟碱。烟草生物碱是烟草特有亚硝胺的直接前体物之一，在烟草调制和卷烟燃吸过程中易代谢为降生物碱，进而与亚硝酸盐形成有致癌性的烟草特有亚硝胺，尤其是烟碱向降烟碱转化是导致烟叶NNN和总TSNA含量增高的主要因素之一。因此烟草中生物碱的含量增高，极大影响烟叶的香味品质、可用性和卷烟制品的生理强度、烟气特征和吸食安全性[1-2]。 美国烟草工业1977年制定了白肋烟烟叶中降烟碱、新烟碱和假木贼碱三种生物碱的最高限量，这三种生物碱总和占总生物碱的比例不能超过20%，近年来已将标准降到了15%，其他烟叶主要生产国家也都制定了烟叶以及品种选育中单株选择的降烟碱控制标准，以保证烟叶具有优良的品质和较高的可用性[1]。1999年，加拿大已发布了烟草和烟草制品中主要生物碱的标准检测方法[3]。目前我国还没有一套完整、系统的烟草中主要生物碱的测定方法，非常必要建立一套适用性强、稳定可靠的烟草及烟草制品中主要生物碱的测定方法。 文献调研表明，烟草主要生物碱的提取可采用索氏萃取[4]、机械振荡[5]、超声波振荡[6]、固相微萃取（SPME）方法[7]。索氏萃取所需时间最长，SPME的定量重复性较差，机械振荡所需要的时间也相对较长，而超声波振荡的萃取时间短，样品萃取较完全，可作为烟草主要生物碱的最佳萃取方法。 烟草主要生物碱的定量分析大多数采用GC-FID[8]、GC-NPD[9]、GC/MS[10-11]，应用HPLC分离测定烟草生物碱的文献较少[12-13]，毛细管电泳分析的方法也有报道[14-15]，但毛细管电泳分析仪器很昂贵，采用的UV检测器对某些生物碱的灵敏度较低，不是理想的分析手段。GC-FID对含氮化合物检测的选择性较GC-NPD差，而GC-NPD在定量检测烟草中含量较低的次级生物碱时，其灵敏度要低于GC/MS-SIM，故 GC/MS-SIM是定量分析烟草主要次级生物碱的首选分析手段。 本项目采用超声波振荡溶剂萃取对烟草和烟草中烟碱、降烟碱、麦斯明、新烟碱和假木贼碱进行提取，使用GC/MS-SIM和内标法对目标化合物进行定量分析。 2.实验 2.1. 仪器与试剂 色谱纯溶剂：甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷，氢氧化钠（分析纯），无水硫酸钠（分析纯，550℃干燥至少2h），三乙胺，2-甲基喹啉，2,4’- 二联吡啶，烟碱，降烟碱，麦斯明，假木贼碱，新烟碱标准物质，纯度至少98% 分析天平：感量0.1毫克天平，超声波清洗机，Agilent 6890/5975 型气相色谱质谱联用仪；毛细管色谱柱：弹性毛细管柱DB-35MS、DB-5MS、DB-17MS柱，规格均为30m×0.25mm×0.25μm。 2.2 溶液配制 2.2.1 含0.01%三乙胺的三氯甲烷溶液 1L三氯甲烷溶液中加入100μL的三乙胺，并混合均匀。 2.2.2 内标溶液 内标储备液 准确称取450.0mg2-甲基喹啉，25.0 mg 2,4’- 二联吡啶置于250 mL的棕色容量瓶中，加入含0.01%三乙胺的三氯甲烷溶液稀释定容至刻度。（储备液储存条件：-20℃冰箱内可保存6 一级内标 准确移取内标萃取储备液50.0 mL加入500mL棕色容量瓶中，用含0.01%三乙胺的三氯甲烷溶液定容至刻度。 2.2. 生物碱 .1 准确称取约400.0mg烟碱，置于25mL的棕色容量瓶中，用含0.