兰花之组织培养技术-1pdfnet.DOC

PAGE PAGE 10 蘭花組織培養的進展 陳福旗 國立屏東科技大學農園系、熱帶農業暨國際合作研究所 摘要 蘭花為台灣重要切花與盆花，尤其以蝴蝶蘭、文心蘭、及拖鞋蘭為最具潛力之種類。目前產業界已經能自行利用無菌播種生產實生苗，及利用生長點或花梗節腋芽培養來大量生產組織培養苗，甚至亦有利用生長點或試管苗葉片誘導擬原球體 (PLBs) 而增殖的例子。由文獻探討組織培養所使用培養基配方，主要係使用改良MS或花寶為基本鹽類，並添加不同量的BA及NAA；近年亦有使用棉花落葉劑thidiazuron進行增殖的報告，其具有極強的細胞分裂素活性，然而是否會引起組培苗變異仍有待探討。由於品種間的差異相當大，組織培養量產效率就不同，因此產業界均自行研發認為具有實用性的配方。本文概括性地探討培養基、生長調節劑、糖類、及其他因子對蝴蝶蘭及文心蘭再生之影響。 一、前言 臺灣南部為蝴蝶蘭的原生地之一，其他原生地分佈於菲律賓群島、澳洲、新幾內亞、印尼、馬來西亞、泰國、越南、中國雲南、四川、海南島等區域，全球約有50個原生種。過去二十多年以來，由於民間趣味者的栽培及育種，加上水牆溫室及新栽培技術的引進，使臺灣地區的蝴蝶蘭生產形成一個產業，其產值約為每年30-40億元 (李、2002)。主要市場在日本、美國、中國大陸、歐洲等國家。蝴蝶蘭之品種種類相當多，主要由蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)、及該屬與朵麗蘭屬(Doritis) 雜交之屬間雜種 (Doritaenopsis)。目前蝴蝶蘭盆花在荷蘭及美國盆花市場均已躍居領先地位，荷蘭之蝴蝶蘭公司更積極投入組織培養量產及品種選育；而我國在過去由公家機構或大學進行之蝴蝶蘭相關研究，著重於開花調節 (李哖、1986) 及栽培管理技術，組織培養或無菌播種及幼苗生長雖已有研究報告發表 (涂、李，1987；王、李，1991；Hinnen et al., 1989；Ichihashi, 1997；Tanaka, 1992；Tsai et al., 1992)，對於擬新投入蝴蝶蘭之業者，仍需重新摸索技術，且即使產業界早已經能夠進行量產瓶苗，其組培關鍵技術均被視為產業機密，且組織培養過程待解決的問題仍然不少，例如如何降低組織培養變異、提高增殖倍率、提高產品品質及生產效率等，均有待進一步建立作業程序開發相關技術，以便產業界能參考使用。 文心蘭雜交種係由文心蘭屬 (Oncidium)、齒舌蘭屬 (Odontoglossum)、堇花蘭屬 (Miltonia) 及其他可相互人為雜交的屬間雜交種所組成。商業用途為供切花及盆花生產。在花卉市場中販售的蘭科植物中，係一種重要的盆花，尤其是歐美市場消費盆花中價格不錯且銷量不少的種類。 由於蘭花的種類極多，其組織培養技術及各種配方差異極大，本文僅就蝴蝶蘭及文心蘭進行討論。其他蘭屬的組織培養，可參考Arditti Ernest (1993)、富山昌克 (2000)等之著作。 二、蝴蝶蘭組織培養 蝴蝶蘭種苗生產主要使用兩種途徑，其一為經雜交授粉果莢成熟時，利用無菌播種，生產實生苗 (李，1990)；另一途徑為利用花梗上未著生花苞的節位，或頂端分生組織，或利用幼嫩花梗節間，進行培養及增殖 (朱、1988；Tanaka, 1992)，增殖方式包括誘導擬原球體 (protocorm-like bodies, PLBs)(Ishii et al., 1998; Lin, 1986)、以及以芽體增殖方式進行繁殖。以硝酸銀浸漬花梗節或添加於培養基中，可降低蝴蝶蘭花梗培養時的褐化，並可提高組織培養效率 (王、李，1991)。Young 等人 (2000) 利用生物反應器來增殖PLBs，其增殖倍率雖高，並未提到其穩定性。Yamazaki 等人 (1997) 研究11 個蝴蝶蘭及朵麗蝶蘭品種之花梗及其莖頂培養，在New Dogashima 培養基中產生芽體或PLBs的能力因品種而異。由以往組織培養報告中可以看出，大多數的文獻均使用細胞分裂素BA及生長素NAA，所培養出的植株，有的報告說沒有觀察到變異 (Tokuhara. Mii, 1993)，有的則會產生變異 (Chen et al., 1998；Tokuhara Mii, 1998)，且變異率介於0%到100% (Tokuhara Mii, 1998)。此外若於培養基中添加2,4-D，可能會造成組織培養苗倍數體的變異 (Mishiba et al., 2001)；因此有必要重新檢討評估蝴蝶蘭組織培養增殖體系、培養基類型及生長調節劑種類對於芽體增殖之效果，及其潛在之變異性，以便產業界可以在進行組織培養時，做為選擇培養基之參考。 1、基本培養基 Murashige Skoog (1962) 為最常被使用的基本培養基，然而在蝴蝶蘭組織培養上，