狆21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建.PDF

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１１４２８ １０７１１０８０ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 狆２１基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核 表达载体构建 赵贵民，杨文琳，吴苏君，云 彦，雷安民 　 （西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，陕西省农业分子生物学重点实验室， 杨凌 ７１２１００） 摘 要：本研究旨在检测 ２１基因在牛卵成熟过程中的表达，并构建其真核表达载体。首先利用 ＲＴＰＣＲ和免疫 　 狆 荧光染色对不同成熟阶段牛卵内 的 和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了 基因并 狆２１ ｍＲＮＡ 狆２１ 构建 ｐＶｅｎｕｓＰ２１真核表达载体。经脂质体 ２０００介导重组质粒 ｐＶｅｎｕｓＰ２１转染 Ｈｅｌａ细胞，通过荧光显微镜观 察、 检测，确认重组质粒在 细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将 体外转录 ＲＴＰＣＲ Ｈｅｌａ 狆２１狏犲狀狌狊 为ｃＲＮＡ，并注射牛卵母细胞，荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示，在牛卵体外成熟过程中，各时期均存在 狆２１基因ｍＲＮＡ及蛋白的表达。构建的真核表达载体 ｐＶｅｎｕｓＰ２１能够在 Ｈｅｌａ细胞中正确表达及定位。狆２１狏犲 狀狌狊ｃＲＮＡ显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位，为研究 Ｐ２１在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作 用奠定了基础。 关键词：牛卵母细胞； 基因；体外转录；显微注射 狆２１ 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８２３Ｑ３４４．１３ Ａ ０３６６６９６４２０１１０８１０７１１０ 　　　　 　　　　 犇犲狋犲犮狋犻狅狀犳狅狉 ２１犌犲狀犲犈狓狉犲狊狊犻狅狀犻狀犅狅狏犻狀犲犗狅犮狋犲狊犕犪狋狌狉犪狋犻狅狀犪狀犱犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀狅犳 狆 狆 狔 犈狌犽犪狉狅狋犻犮犈狓狉犲狊狊犻狅狀犞犲犮狋狅狉 犞犲狀狌狊犘２１ 狔 狆 狆  ， ， ， ， ＺＨＡＯＧｕｉｍｉｎ ＹＡＮＧＷｅｎｌｉｎ ＷＵＳｕｕｎ ＹＵＮＹａｎ ＬＥＩＡｎｍｉｎ ｊ （ ， 犛犺犪狀狓犻犓犲犔犪犫狅狉犪狋狅狉 狅 犕狅犾犲犮狌犾犪狉犅犻狅犾狅 狅狉犃 狉犻犮狌犾狋狌狉犲 犛犺犪狀狓犻犛狋犲犿犆犲犾犾犈狀犻狀犲犲狉犻狀 狔 狔 犳 犵狔犳 犵 犵 犵 ， ， 犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅 犚犲狊犲犪狉犮犺犆