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基于脾气虚脾阳虚大鼠模型复制方法及评价标准研究 　　【摘要】 目的：研究阶段式大鼠脾阳虚证模型的复制方法及客观评价标准。方法：32只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和脾阳虚证模型组（模型组），每组16只。模型组大鼠采用两段式造模方法；第1阶段，即前15 d施加饮食不节和力竭游泳刺激；第2阶段，即后7 d每日早晚2次灌服番泻叶。为质控造模过程，以临床辨证要点为基础，建立了大鼠脾气虚和脾阳虚证的评价标准，并进行客观评价。结果：与对照组比较，模型组大鼠在第1阶段出现了消瘦、食少、神疲和乏力等症状，表明大鼠处于脾气虚状态；在第2阶段，上述变化更加严重，且有畏寒、便溏等症状，提示大鼠处于脾阳虚状态。结论：本研究中采用的两段式造模方法和模型评价标准，能够成功复制大鼠脾阳虚证模型。 　　【关键词】 脾阳虚； 脾气虚； 动物模型； 大鼠； 评价标准 　　脾阳虚证是中医证候研究的重要内容，其大鼠模型的复制方法有单因素法和复合因素法，因后者更好地模拟了该证的病因病机，目前应用较多，但还存在一些急需解决的问题[1-5]。首先是模型的局限性问题。因为脾阳虚证的病因病机复杂，难以全面模拟，所以现有模型实为有限模型，并不具备脾阳气证的全部内涵，必须加以限定。其次是模型复制的质控问题。复合因素造模法多为两段式，即先复制脾气虚，再复制脾阳虚，而模型评价仅涉及脾阳虚，缺乏过程管理[6-11]。为解决上述问题，本研究先后模拟脾气虚证和脾阳虚证的主要病因病机，并建立了阶段性评价标准以质控，成功复制了脾阳虚证的有限模型，特报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 32只SPF级雄性SD大鼠，体质量（200±10）g，购于辽宁省本溪市实验动物中心[SCXK（辽）-2010-0001]，随机分为对照组和脾阳虚证模型组（模型组），每组16只。大鼠饲养于辽宁中医药大学实验动物中心[SYXK（辽）-2013-000-9]，室温18～23 ℃，相对湿度45%～55%，自由饮水进食，适应性饲养1周后，开始实验。 　　1.2 模型复制方法 第1阶段（phase 1， P1），按文献[12]方法复制脾气虚证模型（饮食失节+劳倦型），即模型组大鼠在15 d内：（1）先饱食1 d，再禁食2 d，均不禁水，共5个循环；（2）每日水温35～37 ℃游泳至力竭。第2阶段（phase 2， P2），复制脾阳虚证模型（苦寒泻下型），即每日灌服20%番泻叶水浸剂（2 mL/100 g），早晚各1次，连续7 d。 　　1.3 模型评价标准 以大鼠的生物学特征为基础，根据临床辨证要点，拟定脾气虚证的评价标准：消瘦，食少，神疲，乏力；脾阳虚证模型评价标准：前述标准加畏寒、便溏。 　　1.4 模型评价方法 分别在P1、P2，每组取8只大鼠进行评价。 　　1.4.1 代谢水平评价 上午9～10时测量其体质量以评价消瘦；测肛温以评估畏寒；单只放入代谢笼24 h后计算进食/水量，即投食/水量-剩余量，以评价食少；按文献[12]方法收集粪便，检测大便含水率，即（大便湿重-大便干重）/大便湿重×100%，观察便溏情况。 　　1.4.2 神疲评价 采用TM-Vision行为学实验系统（成都泰盟科技有限公司），按文献[13]方法进行检测，即将大鼠放入箱体中心，观察5 min内大鼠的运动距离和站立次数，彻底清洁箱体后，检测下一只大鼠。 　　1.4.3 乏力评价 采用YLS-13A大小鼠抓力测定仪（济南益延科技发展有限公司）检测前肢抓力[13]。先用右手将大鼠按放在抓力板上，左手向前推抓力板，然后右手向后滑至鼠尾部，左手轻轻松开抓力板，待大鼠用力抓住抓力板时，及时加力后拉，以得到最大抓力。专人连续测量3次，取平均值。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用单因素方差分析，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 大鼠代谢水平 由表1可见，与对照组P1比较，模型组P1大鼠的体质量、进食量和进水量均下降，该组大鼠出现消瘦和食少；与对照组P2比较，模型组P2的体质量、肛温、进食量和进水量均减少，该组大鼠出现了消瘦、畏寒和食少，而大便含水率增加，该组大鼠出现便溏；与模型组P1比较，模型组P2的体质量和肛温均下降，但大便含水率升高。 　　2.2 大鼠神疲乏力情况 图1和表2可见，对照组P1和P2比较无明显差异，大鼠活动区域大，运动距离远，站立次数多，前肢抓力大；与对照组P1比较，模型组P1和P2的活动区域明显变小，运动距离、站立次数和前肢抓力均明显下降，提示两组大鼠出现了神疲和乏力现象；与模型组P1比较，模型组P2的活动区域更小，甚至没有形成闭合运动轨迹，上述3个指标均降低，表示该组大鼠的神疲和乏力