植物组织培养是园艺技术专业技能训练课件之一.doc

植物组织培养技能训练教程 PAGE PAGE 1 前 言 植物组织培养是园艺技术专业技能训练课程之一，是遵循高职教育规律，坚持以服务为宗旨，就业为导向，进行教学改革，是以2008年教学大纲为基础，将组织培养以工作过程分解能力培养体系，按工作任务模块进行了调整和修改，注重加强理论与实践的结合，在掌握“必需、够用”的组培基本理论同时，能够进行娴熟的植物组织培养操作，充分利用校外实习基地与学校组培实训基地，采取“校企一体、工学结合”，并以真实项目为载体，在教师指导下，以学生为主体实现项目，做到“项目驱动，学做一体”的教学特色，使学生完全符合植物组织培养岗位的职业要求，培养学生的组织培养岗位职业能力，满足学生在浙江大学试验农场、连云港振兴恒巨生物有限公司、三益集团实习就业需求。 第一部分：组织培养常用仪器设备使用及维护 1—1高压蒸汽灭菌锅的使用及维修 1 原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 2 使用方法 （1）装锅：先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直立放入内锅，试管口或三角瓶口向上且不要贴锅边，避免冷凝水浸入试管或三角瓶。灭菌物品不要装得太满，留出一定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。 （2）盖上锅盖：盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插入锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的螺丝，并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。 （3）排放冷空气：将灭菌锅放在电炉上加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3～5 min，关闭放气阀。 （4）升压、保压、降压：当压力表指针指到1.05 kg/cm2处时(灭菌所需压强)开始计时，继续维持该压强20～30min。灭菌结束待压力表指针自然回到“0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到“0 1—2 超净工作台 超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。 1 原理　 超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。从操作质量和对环境的影响来考虑，以垂直式较优越。由供气滤板提供的洁净空气以一个特定的速度下降通过操作区，在大约操作区的中间分开，由前端空气吸入孔和后吸气窗吸走，在操作区下部前后部吸入的空气混合在一起，并由鼓风机泵入后正压区，在机器的上部，30％的气体通过排气滤板从顶部排出，大约70％的气体通过供氧滤板重新进入操作区。为补充排气口排出的空气，同体积的空气通过操作口从房间空气中得到补充。这些空气绝对不会进入操作区，只是形成一个空气屏障。 2 调试　 所在的超净工作台出厂前都经过严格的测试，以保证正常的使用。但这并不是说，厂家的测试就能代替操作者使用前作必要的检验和调试。因为超净工作台所处的环境各异，只有经过适当的检验和调试，才能最大限度地发挥设备的作用。 在调试前应为机器选定一个较好的环境。将其置于一间有空气消毒设施的无菌室是最好的，如果条件不具备，就应将机器安放于人员走动少、较清洁的房间中。调整各脚的高度，以保证稳妥和操作面的水平。超净工作台的供电应采用一条专门电路，以避免电路过载造成空气流速的改变。与简陋的无菌罩相比，超净台具有允许操作者自由活动，容易达到操作区的任何地方以紫外线杀菌灯和照明用日光灯是超净工作台的标准配置，鼓风机提供空气流动的动力，这些部件是否正常工作是一目了然的。最困难也是最重要的是检查空气滤板其密封性，它直接关系到机器的正常使用。最简单的检查方法是营养琼脂平板法。 新购买的和久置未用的超净工作台除用紫外灯等照射外，最好能进行熏蒸处理，然后在机器处于工作状态时在操作区的四角中心位置各放一个打开的营养琼脂平板，两小时后盖上盖并置37℃培养箱中培养24小时，计算出菌落数。平均每个平皿菌落数必须少于0.5个。 3 维护　 超净工作台是一台较精密的电气设备，对其进行经常性的保养和维护是非常重要的。 首先要保持室内的干燥和清洁，潮湿的空气既会使制造材料锈蚀，还会影响电气电路的正常工作，潮湿空气还利于细菌、霉菌的生长。清洁的环境还可延长滤板的使用寿命。 另外，定期对设备的清洁是正常使用的重要环节。清洁应包括使用前后的例行清洁和定期的处理。熏蒸时，应将所有缝隙完全密封，如操作口设有可移动挡板封盖的类型超净工作台，可用塑料薄膜密封。 超净工作台的滤板和紫外杀菌灯都有标定的使用年限，应按期更换。 1—3 光照培养箱的