GB/T 17999.8-1999SPF鸡　试管凝集试验.pdf

GB/r17999.8-1999 前 言 用血清平板凝集试验监测鸡白痢沙门氏菌感染，结果难以判定时，可用试管凝集试验(TA)进行复 检，为此本标准规定了SPF鸡试管凝集试验。 SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检 测方法.本标准为 S《PF鸡 试管凝集试验》。 SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分: GB/T17999.1-1999SPF鸡 红细胞凝集抑制试验; GB/T17999.2-1999SPF鸡 血清中和试验; GB/T17999.3-1999SPF鸡 血清平板凝集试验; GB/T17999.4-1999SPF鸡 琼脂扩散试验; GB/T17999.5-1999SPF鸡 酶联免疫吸附试验; GB/T17999.6--1999SPF鸡 胚敏感试验; GB/T17999.7-1999SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验; GB/T17999.9-1999SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出 本标准由农业部畜牧兽医司归口。 本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物中心。 本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红。 中华人民共和 国国家标准 Gs/T 17999.8一 1999 SPF鸡 试管凝集试验 SPFchicken-Tubeagglutinationtest 1 范围 本标准规定了试管凝集试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。 本标准适用于SPF鸡感染鸡白痢沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌后的抗体监测。 2 原理 同血清平板凝集试验，亦是细菌性抗原与相应的抗体结合后 在适量电解质参与下，经过一段时间 出现肉眼可见的凝集现象，只是结果判定以凝集价表示 3 试剂和材料 3.1抗原:试管凝集试验用鸡白痢一鸡伤寒抗原(含菌10亿/mL) 32 阳性、阴性血清。 13 被检血清口 3.4 o.5Y,石炭酸生理盐水: 了，炭酸 59; a化钠 8.59; 蒸馏水 1000mL; 混合溶化，6.897Pa 20min消毒备用 15 常规血清学试验用品。 4 操作程序 4.1每份被检血清需要5支小试管(口径8mm-10mm)。第1管加石炭酸生理盐水1.8mL，其余管 各加Iml。 4.2第1管加被检血清。.2mL，与石炭酸生理盐水混匀(使成1:10稀释)。取1mL移至第2管，混匀 后连续倍比稀释至第4管，最后从第4管内吸出1mL弃去。如此各管血清最后稀释依次为I:20, 1:40,1,80,1:160,1:320 4.3 各管加入抗原液1mL 4.4 振荡混匀后 置37C感作24h，观察结果。 4.5 梅次试验须设三种对照各一份。 4.5.1 抗原对照:在试管中加抗原液1mL，再加。.5%石炭酸生理盐水1mLo 4.5.2 阳性血清对照 阳性血清稀释至原来效价，每管加入抗原液1mL 4.5.3 阴性血清对照:操作方法同被检血清。 4.5.4 全部试管振荡后，置37`C24h后移入4C-8C冰箱过夜，使结果更易判定 4.6 结果观察 国家质量技术监督局1999一11-10批准 2000一04一O1实施 GB/T 17999.8-1999 4.6.1从40C-8℃冰箱取出试管架，暂不振动试管。 4.6.2 轻轻取出每支试管，先观察试管内上清液和管底凝集物，再轻振管底，使凝块从管底升起，最后 按液体清浊、凝块大小记录。 4.6.3 观察结果时应首先观察抗原对照与阴性血清对照，均应呈 “一，’(即不凝集)，阳性血清对照呈不 同程度凝集，表明试验可靠。 4.6.4 凝集结果判定见表to 表 1 试管凝集结果判定 类 别 试 管 所 见 结 果