预防兽医学五龙鹅MHCⅠ基因克隆、组织表达及分子特性的研究设计论文.doc

硕士学位论文 五龙鹅MHCⅠ基因克隆、组织表达 及分子特性的研究 Molecular cloning, expression and characterization of Wulong goose MHC class I 研究生姓名： 导 师： 专 业： 预防兽医学 研 究 方 向： 生物技术 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅰ 英文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅲ 缩略符号…………………………………………………………………………………………………ⅴ 文献综述 1 1 综述前言 1 2 MHCⅠ分子结构与作用机理 2 3 畜禽MHC的研究概况 4 4 MHC与畜禽抗病性关系的研究 6 研究内容 1 五龙鹅MHC classⅠcDNA基因克隆及序列分析 9 1.1 试验材料和方法 9 1.1.1 实验动物 1.1.2 质粒和菌株 1.1.3 主要工具酶及试剂 1.1.4 试验仪器 1.1.5 所用溶液及其配制 1.1.6 五龙鹅MHC classⅠcDNA基因的扩增和测序 1.2 结果与分析 18 1.2.1 五龙鹅脾脏Total RNA 1.2.2 五龙鹅MHC classⅠcDNA基因扩增 1.2.3 扩增条件的优化 1.2.4 插入片段的转化 1.2.5 插入片段的检测 1.2.6重组质粒的序列测定 1.2.7 测序结果 1.3 讨论 21 2 五龙鹅MHC classⅠ基因组DNA克隆及序列分析 23 2.1 试验材料和方法： 23 2.1.1 试验材料 2.1.2 试验方法 2.2 试验结果分析 24 2.2.1 五龙鹅MHC classⅠ基因组基因的PCR扩增与鉴定 2.2.2 重组质粒的鉴定 2.2.3 重组质粒测序结果 2.2.4 五龙鹅MHC classⅠ基因组基因测序结果分析 2.3 讨论 26 3 利用Real time-PCR对鹅MHC class I基因的检测 28 3.1 试验材料和方法 28 3.1.1 试验材料 3.1.2质粒和菌株 2 3.1.3主要工具酶及试剂 3.1.4 主要仪器 3.1.5 试验方法 3.1.6 五龙鹅MHC class I基因逆转录 3.1.7 五龙鹅MHC class I 3.1.8 3.1.9 3.2 试验结果分析 33 3.2.1 目的基因的PCR扩增检测 3.2.2 3.2.3 3.3 讨论 36 4 鹅MHC class I基因的分子特性的分析 39 4.1 材料与方法 39 4.1.1 试验序列 4.1.2 序列的提交 4.1.3 核酸序列的基本分析 4.1.4 鹅MHC class I蛋白质一级序列的基本分析 4.1.5 鹅MHC class I蛋白质二级结构和功能预测 4.1.6 鹅MHC class I蛋白质三级结构预测 4.1.7 同源性分析与系统发育分析 4.2 试验结果与分析 43 4.2.1 核酸序列基本分析 4 4.2.2 蛋白质一级序列的基本分析 4.2.3鹅MHC class I蛋白二级结构和功能预测 4.2.4 鹅MHC class I蛋白三级结构和功能预测 4.2.5 同源性分析 4.3 讨论 51 结 论 52 参考文献 53 附 录 58 致 谢 69 Contents Abstract…………………………………………………………………………………………………ⅰ English abstract…………………………………………………………………………………………ⅲ Abbreviation Key………………………………………………………………………………………ⅴ Text Summary 1 1 Summary Preface 1 2 Molecular Structure and mechanism of action of MHCⅠ 2 3 General situation of MHC in livestock and poultry 4 4 Research of the Disease Resistant of MHC with livestock and poultry 6 1 Cloning and Sequence Determine of MHC classⅠcDNA in Wulong goose 1.1 Materials and method