外源ABA处理玉米叶片酵母双杂交cDNA文库构建及评价.docVIP

外源ABA处理玉米叶片酵母双杂交cDNA文库构建及评价 　　摘要：为深入研究ABA信号转导机制以及筛选该信号途径中相关重要蛋白的相互作用，利用Gateway技术，以外源ABA处理的玉米叶片为材料首先构建了cDNA初级文库，初级文库再通过LR重组的方式最终构建成以pDEST22为目的载体的酵母双杂交cDNA文库。经质量鉴定，该文库的滴度为3.9×106 CFU/mL，文库总容量达到1.17×107 CFU，平均插入cDNA片段长度大于800 bp，重组率大于95%。结果表明所获酵母双杂交文库质量较高，符合文库构建的标准，保证了文库的覆盖度，为进一步开展互作蛋白筛选的后续工作奠定了基础。 　　关键词：ABA；玉米；酵母双杂交；cDNA文库；滴度；重组率；互作蛋白 　　中图分类号： S513.01；Q78 　　文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）04-0058-04 　　脱落酸（ABA）是一种重要的植物激素，它在植物生长发育的各个方面，包括种子发育、萌发和休眠、营养生长及对各种生物、非生物胁迫的响应等方面起作用[1-2]。水分胁迫下（包括干旱、盐渍），植物体通过迅速积累ABA以促进气孔关闭以及调节众多基因的表达，从而使植株对逆境环境做出适应反应[3-6]。大量研究表明，ABA信号转导是一个非常复杂的网络，许多重要的中间组分如胞内钙离子、钙调素、磷酸