复合益生菌对大菱鲆生长指标血液生理生化指标影响.docVIP

复合益生菌对大菱鲆生长指标血液生理生化指标影响 　　摘 要：探讨复合益生菌对大菱鲆生长指标和血液生理生化指标的影响，结果表明复合益生菌作为饲料添加剂可以有效提高大菱鲆的增重率、特定生长率、饲料利用率，一定程度上影响了大菱鲆全鱼及背部肌肉的粗成分，但并没有影响大菱鲆血液生理生化指标。 　　关键词：益生菌；大菱鲆；生长指标；血液生理生化指标 　　大菱鲆（Scophthalmus maximus L.）原产于欧洲，是一种冷水性底栖鱼类，易接受配合饲料而且转化率高，耐低氧且病害少，是北方海水养殖的优良品种[1]。 　　由于益生菌具有增强免疫力、促进生长、维持动物消化道环境等功能，因此可作为新的绿色的添加剂广泛运用于食品、医药、饲料等方面[2]。桂琳等研究发现添加复合益生菌的饲料能有效提高草鱼的特定生长率、增重率、饲料利用率[3]。李小梅等也发现以光合细菌、短小芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌组成的复合益生菌作为饲料添加剂能有效促进斜带石斑鱼的生长性能，如特定生长率、体增重率、体增长率、肥满度，且饲料系数也有所下降[4]。但是益生菌对大菱鲆生长的影响很少有报道。 　　动物机体的代谢过程中血液是动物体内循环系统的重要组成部分[5]。血液的生理生化指标是评价水产动物健康状况、营养状况及对环境的适应状况的重要指标之一[6]。目前关于水产动物血液生理生化指标的研究报道很多[7-9]，但是关于复合益生菌作为饲料添加剂对大菱鲆血液的影响很少报道。 　　因此本试验通过饲料中添加不同梯度的复合益生菌来探讨其对大菱鲆生长性能和血液的影响，以期为大菱鲆高效、健康养殖提供理论基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 益生菌的来源与鉴定 　　本试验所用复合益生菌由大连百安泰生物科技有限公司提供，该复合益生菌为菌液，根据Ran C. [10]的方法测定活菌总数为5×109 CFU/mL，在北京诺禾致源生物信息科技有限公司?M行16s rDNA V4区鉴定，以相对丰度值大小为标准，该复合益生菌主要含有醋杆菌属（Acetobacter）、乳杆菌属（Lactobacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas），其相对丰度分别为0.82、0.14、0.002。 　　1.2 试验饲料的配制 　　根据Irfan Ambas等[11]的方法，试验饲料制备分为两个步骤，分别为基础饲料的制备和菌液的喷洒。 　　基础饲料的制备如下：饲料原料粉碎，过40目筛，利用搅拌机（B10高速三功能搅拌机）进行混匀，最后放入制粒机（东南干燥设备有限公司，XL-250）压成粒径分别为1.8 mm和2.0 mm的颗粒饲料，将制成的饲料放入烘箱中40 ℃烘干至水分为8%左右。基础饲料的配方主要有鱼粉、鱼油、大豆卵磷脂等，具体饲料配方及营养成分见表1。 　　饲料制成后于-20 ℃保存，为保证试验的准确，根据Ran C.[10]的方法定时测定活菌总数以确保每日活菌数符合试验要求，具体结果见图1。 　　1.3 饲养管理 　　饲养试验是在大连海洋大学农业部北方重点试验室进行，试验所用大菱鲆幼鱼购买于大连天正集团养殖场，试验共进行60 d，具体操作及要求如下。试验前将大菱鲆暂养两周适应环境。试验前禁食24 h，试验分为三组，每组三个重复，共九个200 L方形蓝色聚乙烯水槽，每个放养20尾鱼，初始体重为（20.04±0.23） g。每日投喂两次，分别为7：30和16：30，采取表观饱食投喂。试验中投喂颗粒饲料，根据图2所示，20 d后活菌数有所下降已经不能达到试验要求，因此需更换饲料。每日投喂前，利用虹吸法吸取残饵粪便，每日的投喂量需进行称重。驯养及正式试验均采用静水养殖，每日换水两次以保证水质要求（9：30和18：00），日换水量为总体的40%～60%，24 h充气。饲养期间保证光照一致，试验期间定期测定养殖水体盐度，每周测定养殖水体溶氧、温度和pH值。试验期间水温为17.8±1.23 ℃、溶氧为6.96±0.71 mg/L、pH值为8.20±0.20，盐度32.00±2.00‰。 　　图1 Log10的饲料中复合益生菌总数 　　1.4 试验样品的采集 　　试验结束后，对大菱鲆的生长指标进行测定，测定前大菱鲆需停食24 h，以确保鱼腹中没有残余饵料从而引起误差。将水槽中的所有大菱鲆取出，用干净的纱布擦去表面的水分进行称量，计算增重率、饲料系数、特定生长率、肥满度。从每个试验组的三个平行中随机选取5尾鱼于冰盘上取其内脏测定其肝体比、脏体比，并进行尾部取血，采集到的血液分为两个部分：一部分加入肝素钠抗凝剂，用于测定血常规。另一部分血液于4 ℃静置，4 000 r/min离心10 min，取上清液，储存于-80 ℃ 超低温冰箱中，用于血清生化指标分析。此外在各水槽中随机选取5尾鱼用于测定