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复方g莶草胶囊对大鼠急性痛风性关节炎关节滑膜细胞核因子―κB表达影响 　　摘要：目的 通过观察复方?g莶草胶囊对急性痛风性关节炎关节滑膜细胞核因子-κB的影响，探讨其抗炎镇痛作用机制。方法 60 只大鼠随机分成正常对照组15只，模型组15只，复方?g莶草胶囊组15只，痛风宁胶囊组15只。分别给予生理盐水氯化钠溶液、复方?g莶草胶囊药液、痛风宁胶囊药液灌胃3 d，第4 d建立急性痛风性关节炎模型，造模后5 h 切取踝关节滑膜，免疫组化法观察滑膜细胞核因子-κB的表达。结果 造模后受试关节滑膜细胞核因子-κB表达都有显著增强。复方?g莶草胶囊与痛风宁胶囊均可下调核因子-κB的表达，二者间无显著性差异。结论 复方?g莶草胶囊通过下调核因子-κB的表达，来发挥抗炎镇痛作用。 　　关键词：复方?g莶草胶囊；痛风；滑膜；核因子-κB 　　痛风性关节炎（GA）是体内嘌呤代谢紊乱进而使尿酸盐结晶沉积在关节和周围组织引起的一种常见的代谢性疾病，是21世纪对人类健康最具挑战的几个问题之一。近些年来，我们采用经验方复方?g莶草胶囊治疗急性痛风性关节炎取得满意效果，具有抗炎镇痛作用快、药效强、副作用小等优点。为阐明其抗炎镇痛作用机制，本实验通过构建急性痛风性关节炎大鼠模型，观察其关节滑膜细胞核因子κB的表达，探讨复方?g莶草胶囊的干预机制。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1 实验动物 雄性Wistar 大鼠60只，清洁级，由江西中医学院动物实验中心提供并饲养 （许可证书：SYXK，赣，2004-0001）。精确称重，体重（200±20）g。购买后适应性常规喂养3 d，温度约（20±3）℃，湿度60%，明暗周期12 h/12 h，每笼喂养10只实验动物，通风，自由饮水进食，普通饲料喂养。 　　1.1.2实验药物 复方?g莶草胶囊由?g莶草、苍术、土获苓、秦艽、威灵仙、金钱草、丹参、汉防己等药组成，由黑龙江中医药大学第一附属医院制剂室生产，将囊内研粉加蒸馏水溶解配制2%悬浮液。痛风定胶囊由成都中汇制药有限公司生产，批准文号：国药准字将囊内研粉加蒸馏水溶解配制2 %悬浮液。 　　1.1.3主要试剂 大鼠核因子-κB单抗试剂盒（美国Cayman 公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1急性痛风性关节炎动物模型制作方法 参照Coderre等经典方法[1-2]并作改进，即用试敏注射器在受试大鼠右侧踝关节背侧从450方向插入胫骨肌腱内侧，将0.2 ml尿酸钠溶液（浓度2.5 g/100 ml）注入到踝关节腔，构建急性痛风性关节炎模型。 　　1.2.2尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备 194 ml蒸馏水加NaOH（1 mol/L）6 ml，煮沸，加1 g尿酸，用HCl（1 mol/L）调pH至7.2，搅拌冷却，4℃冰箱保存24 h，去上清，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入70℃干燥箱烘2 h，取出，刮下粉末，研钵内研成细末，用孔径250 μm的金属筛过筛，制成尿酸钠结晶，取250 mg尿酸钠结晶加9 ml生理盐水，再加1 ml吐温80，加热搅拌，配制成10 ml尿酸钠溶液。 　　1.2.3动物造模及分组 根据实验设计要求将实验大鼠随机分成正常对照组15只，模型组15只，复方?g莶草胶囊组15只，痛风定组15只。复方?g莶草胶囊组与痛风定组分别予复方?g莶草胶囊药液和痛风定悬浮液3 ml灌胃，正常对照组与模型组等容量生理氯化钠溶液水灌胃，2次/d，连续3 d。各组第4 d 第1次灌胃后1 h造模。正常对照组右踝关节腔内注射0.2 ml 生理盐水，其余各组注射0.2 ml尿酸钠溶液。在造模5 h后处死切取受试关节滑膜。标本经10%福尔马林固定，组织切片。 　　1.2.4免疫组织化学染色 按试剂盒要求操作，DAB 显色，苏木素衬染，脱水，透明，中性树脂封片。 　　1.2.5组织学观察和阳性程度判定 标本在200倍光镜下观察，对核因子-κB阳性细胞计数：每例标本观察1 张切片，随机选取5个视野，每个视野观察100 个细胞，计算阳性细胞数，结果以阳性细胞百分率表示。仅细胞核着暗蓝色者为阴性，细胞浆内或核膜上呈棕黄色者为阳性。 　　1.3统计学方法 数据采用SPSS 10.0统计软件进行分析。方差齐性检验后采用单因素方差分析。 　　2 结果 　　正常对照组中核因子-κB 在滑膜及周围组织细胞有较少的表达，染色相对较浅。与正常对照组相比，模型组滑膜组织中衬里层细胞、衬里下层浸润的炎症细胞、血管内皮细胞的胞质和胞核内均有明显表达（P0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　祖国医学认为痛风性关节炎应属 “痹证”范畴。历代医家对痛风性关节炎一证有很多论述，如《丹溪心法?痛风》描述痛风的症状为“四肢百节痛是也”。《