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多壁碳纳米管修饰铂基片石英晶体微天平研究白细胞介素6与其受体相互作用 　　摘 要 在pH 7.4、室温条件下，用多壁碳纳米管（MWCNTs）修饰石英晶体微天平（QCM） Pt 基片，经过EDC/NHS活化后固定白细胞介素-6（IL-6），检测不同浓度可溶性白细胞介素-6受体（sIL-6R）与IL-6的结合所引起响应信号的变化，并用Origin软件对数据进行拟合分析，构建了一种高性能实时监测IL-6与sIL-6R之间相互作用的亲和型生物传感器。实验表明: 随着sIL-6R浓度的增加，其结合量呈线性增长，相关系数（R2）为0.997。IL-6与sIL-6R之间相互作用的结合平衡常数（K??A）和解离平衡常数（K??D）分别为3.37×106 L/mol和2.97×10－7 mol/L。验证了通过MWCNTs修饰的Pt QCM能够高效监测IL-6与sIL-6R间相互作用及动力学过程，有助于阐明二者的生物学功能。 　　关键词 多壁碳纳米管； Pt基片； 石英晶体微天平； 白细胞介素-6； 可溶性白细胞介素-6受体 　　 　　 　　 2010-12-08收稿；2011-04-12接受 　　本文系国家自然科学基金（Nos.和天津市自然科学基金（Nos. 08JCZDJC20600, 09ZCGHHZ00100）资助项目 　　* E-mail: qiangchen@nankai.edu.cn 　　 　　1 引 言?? 　　白细胞介素-6（Interleukin-6, IL-6）是一种多功能细胞因子，在免疫应答、造血系统调控和肿瘤细胞生长等方面发挥重要的生物学效应［1］。IL-6的生物学功能是通过与白细胞介素-6受体（Interleukin-6 receptor, IL-6R）相结合，从而触发胞内信号转导来实现的。IL-6R有两种，一种分布在细胞膜表面，另一种分布在体液中的可溶性IL-6R（Soluble interleukin-6 receptor, sIL-6R）中。研究表明，sIL-6R可作为IL-6介导生理应答反应的高效增强剂发挥作用［2,3］。?? 　　IL-6和sIL-6R之间的相互作用监测通常采用放射免疫技术或酶联免疫法等，但是利用这些检测方法很难对其进行动力学分析，并且操作繁琐、耗时［4］。压电石英晶体微天平（QCM）具有轻便、简单、成本低等特点，并能够实时监测生物大分子间相互作用的动力学过程，因此被广泛应用于生物分析、临床诊断以及环境监测中［5,6］。碳纳米管（Carbon nanotubes, CNTs）是日本科学家Iijima于1991年发现的一种新型碳材料［7,8］。由于CNTs具有优异的导电性能、较强的吸附能力和良好的生物相容性等［9,10］，被广泛应用于药物投递、细胞运输、骨骼诱导等体系中［11～13］。由于生物体系中存在大量Cl－，而Pt基片在此体系中可以保持高稳定性，因此使Pt QCM表现出很多独特性质［14,15］和高抗干扰能力［16］。由于Pt 基片很难通过常规的酰胺化方法与生物大分子相连，因此Pt QCM很少应用于监测蛋白、抗体或生物组织等大分子中［17］。本实验将羧基化的MWCNTs修饰在Pt 基片表面，经过EDC/NHS活化后固定IL-6，制备了一种监测IL-6和sIL-6R相互作用动力学过程的高性能的新型生物传感器。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂?? 　　SEIKO QCA917型石英晶体微天平（Quartz crystal microbalance, QCM，EG＆G公司）；AT-切割石英晶体铂金基片（表面积为（0.19±0.01）cm2），工作频率为9 MHz；KQ-218型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；QUANTA200型扫描电子显微镜（SEM，FEI公司）。?? 　　1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙酸）碳二亚胺（1-Ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）carbodimide, EDC）、N-羟琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide, NHS）、牛血清白蛋白（BSA，MW 66000）, 均购自Sigma公司; 重组人IL-6及sIL-6R（Peprotech公司）; MWCNTs （O. D. ＝8～12 nm，Length＝0.5～1.0 　　 m，中国科学院成都有机化学有限公司，纯度＞95%）。0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）。其它试剂均为分析纯。实验用水为Milli-Q去离子二次蒸馏水; 实验温度为25 ℃。 　　2.2 碳纳米管的预处理?? 　　利用浓H??2SO??4-浓HNO??3（3∶1，V/V）