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老年医学专业毕业论文 [精品论文] 雄激素受体基因及钙蛋白酶10基因多态性与老年男性代谢综合征的相关性研究 关键词：老年男性病人 代谢综合征 雄激素受体 钙蛋白酶10 基因多态性 危险因素 摘要：代谢综合征(Metabolic Syndrome，MS)是一组复杂的代谢紊乱症候群，其纽分包括血糖异常、脂代谢紊乱、高血压、肥胖等代谢异常。随着社会经济的发展，代谢综合征的发生率随年龄增长而增加。估计全球大约有四分之一的成年人患有代谢综合征，其死于心脏病或中风的风险是无代谢综合征人群的2倍，而且代谢综合征人群发生2型糖尿病的风险升高5倍。 随着对代谢综合征研究的深入，近年来有关雄激素在男性代谢综合征发病中的作用日益受到关注。有研究显示，老年男性代谢综合征患者存在低水平的脱氢表雄酮(DHEAS)、总睾酮(TT)、性激素结合球蛋白(SHBG)、游离睾酮(FT)和雄激素受体(androgen receptor，AR)。多数流行病学资料显示低水平的睾酮是男性代谢综合征和糖尿病的危险因素。已有文献报道较低的总睾酮、游离睾酮和性激素结合球蛋白(SHBG)浓度与代谢综合征强烈相关。雄激素通过雄激素受体发挥生理作用。雄激素受体基因第一外显区存在CAG重复多态性，目前研究认为AR的表达与功能可能受AR基因CAG重复序列微调控。本研究旨在通过AR基因多态性-AR表达水平-代谢综合征三个环节来观察AR基因多态性对AR表达的调控作用及其与老年男性代谢综合征的关系，为代谢综合征的防治提供一定的理论依据。 钙蛋白酶10(Calpain10，CAPN10)基因是第一个被定位克隆的糖尿病易感基因。有研究表明CAPN10-SNP43G/G基因型个体较G/A，A/A个体更易患糖尿病，且G/G纯合子较G/A，A/A．有更高的收缩压和甘油三酯水平。有学者报道CAPN10-SNP43G/G与中心性肥胖或胰岛素抵抗相关。由此推断在发病机制上，CAPN10基因多态性和代谢综合征密切相关，CAPN10基因可能也是代谢综合征的易感基因。 研究目的: (1)构建AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体(包括完整的AR编码序列和5’-UTR及部分3amp;#39;-UTR，已证实5amp;#39;-UTR和3amp;#39;-UTR为转录调控区)，转染人胚肾HEK293细胞，观察CAG重复序列多态性对AR的转录活性、表达水平的影响。 (2)探讨AR基因第一外显子区CAG重复多态性与老年男性代谢综合征的关系。 (3)观察CAPN10-SNP43G/A等位基因多态性的分布情况，并探讨其与老年男性代谢综合征的关系。 研究对象: 从北京万寿路地区流行病学调查资料数据库中筛选老年男性(＞60岁)312例。代谢综合征患者119例，年龄60-83，平均68.97±5.39。非代谢综合征193例，其中一种代谢紊乱组89例，年龄60-82，平均年龄68.06±4.82；两种代谢紊乱组合组51例，年龄60-81，平均年龄68.29±5.35；无代谢紊乱组53例，年龄60-85，平均68.43±5.21。以上入选者均为久居北京的汉族人。 代谢综合征患者按2005年国际糖尿病联盟IDF关于代谢综合征的诊断标准进行筛选。 研究方法: 实验方法一、AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体的构建 以AR基因CAG重复数为0、21、33基因组DNA为模板，通过重组PCR反应对目的基因进行扩增和拼接，并将其克隆至pwtAR-IRES2-EGFP表达载体。 实验方法二、AR基因在真核细胞HEK293细胞中的表达 将CAG重复数为0、21、33的重组质粒转染人胚肾HEK293细胞，用RT-PCR和Western blot检测AR基因的表达情况。 实验方法三、CAPN10基因多态性的检测 用酚/氯仿抽提核酸法提取研究对象外周血白细胞的基因组 DNA，以DNA为模板，用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应扩增170bp的目的片段，通过PCR产物凝胶电泳图谱进行CAPN10-SNP43G/A基因型判定。 研究结果: (1)成功构建AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体，酶切及测序鉴定正确。 (2)CAG重复数目与AR mRNA和AR蛋白表达水平之间的关系：在 ARmRNA水平，CAG0最高，CAG33次之，CAG21最低。三者比较差别不显著；在AR蛋白水平，三者比较有统计学意义，CAG0表达最高，而CAG21同CAG33的表达量比较差别不大。 (3)四组研究对象的临床特点：随着代谢紊乱成分的增加，体重、BMI、腰围、臀围、收缩压、舒张压、甘油三酯、空腹血糖指标增加，高密度脂蛋白指标降低，MS组与其他组比较，差异更为显著。 (4)代谢