辽宁自然科学基金计划（JH1105）.PDFVIP

辽宁省自然科学基金计划 （JH1/105 ） 面上项目 （原优秀人才培育）（JH1/101 ） 项目可行性研究报告 苯系物对仿刺参的毒性作用机制—基于芳香 烃受体及I 相解毒酶的代谢通路研究 辽宁省科学技术基金委员会 2017 年1 月 1 一、 项目提出的目的及意义； 项目申请人拟在前期研究基础上，深入开展苯系物对仿刺参氧化损伤的分子 作用机制研究。首先，克隆获得仿刺参 AhR 、ARNT 、HIF-1α 基因及苯系物代谢 相关的I 相、II 相解毒酶(CYP、GST 、EH 等)基因，构建这些基因在仿刺参不同组 织的表达谱。苯系物单独暴露，分析这些基因相对表达量、酶活性与苯系物暴露 的剂量效—应关系和时效关系；明确仿刺参体内 AhR/ARNT 是否介导的 I 相、II 相解毒酶参与苯系物氧化代谢；苯系物的氧化代谢是否开启HIF-1α/HIF-1β 介导细 胞缺氧分子应答，转变细胞内氧的消耗，导致生物呼吸爆发，产生过量的活性氧 ROS 。苯系物和CYP 抑制剂联合暴露，分析I 相解毒酶对II 相解毒酶的诱导作用； 阻断苯系物氧化代谢过程，对HIF-1α/HIF-1β 介导细胞缺氧分子应答有何影响，以 及苯系物的氧化损伤作用是否减弱或加强。在外源性缺氧条件下，分析 HIF-1α/HIF-1β 介导细胞缺氧分子应答对 AHR/ARNT 介导苯系物的氧化代谢的影 响。最终，揭示仿刺参体内AHR/ARNT 介导I 相和II 相解毒酶对苯系物的氧化代 谢与HIF-1α/HIF-1β 介导细胞缺氧分子应答的交互作用，深入阐释苯系物对仿刺参 氧化损伤的分子作用机制。项目预期将丰富苯系物对海洋生物的毒性作用机理， 为保护我国近岸海洋生态安全提供理论基础和科学依据。 二、 与项目相关的国内外发展概况及市场需求分析； 2.1 AhR/ARNT 介导I 相、II 相解毒酶参与外源有机化合物在生物体内氧化代 谢 自 Poland 等(1976) 首次从小鼠肝细胞溶质中鉴定出芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AhR)后，有关AhR 与芳香烃受体核转位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator, ARNT)介导的I 相、II 相解毒酶基因的转录调控机制， 即其开启外源有机化合物在生物体内代谢通路的功能已经得到大量研究证实 (Yamaguchi Kuo, 1995; Carrier, et al, 1994)。外源有机化合物包括石油类、多环芳 烃、多氯联苯、烷基酚、有机锡、农药、药物等(Knag Taugbøl, 2013; Chung, et al, 2007; Saurabh, et al, 2010; Vorrink, et al, 2014; Wakui, et al, 2010; Kajta, et al, 2014; Kim, et al, 2015; Brtko Dvorak, 2015; Inadera, 2006; Jarukamjorn, et al, 2010) 。 AhR 是一种以芳香烃化合物为配体的胞质溶胶转录因子，参与细胞信号转导， AhR 与 ARNT 均属于 PAS 亚家族成员，N- 末端含碱性螺旋- 环- 螺旋(basic Helix-Loop-Helix, bHLH) 结构域，C- 末端含谷氨酰胺富域(glutamine (Q)-rich domains, Q-rich domains) 的结构域，AhR 通常情况下无活性，与一些分子伴侣(如： 热休克蛋白90 ，HSP90)胞质溶胶蛋白结合为四聚体复合物，当有配体(如：2, 3, 7, 2 8- 四氯二苯二氧芑，TCDD)存在时，AhR 被激活，从四聚体复合物中解离并转移 至细胞核内，与ARNT 结合成异源二聚体，并与特异的DNA 序列芳香烃反应元件 (Aromatic hydrocarbon response elements ，简称AHRE)结合，激活下游靶基因的转 录