大豆胚芽尖再生体系建立及转基因初步研究.docVIP

大豆胚芽尖再生体系建立及转基因初步研究 　　(1．沈阳农业大学植物保护学院，沈阳110161；2．中国农业科学院生物技术研究所，北京100081； 　　3．农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程，北京100081) 　　 　　摘要：建立了吉林小粒1号的胚芽尖再生体系，对胚芽尖#65380;子叶节#65380;胚轴作为外植体的重生芽发生频率及主要影响因素进行了比较#65377;结果表明，胚芽尖重生芽发生频率高，再生时间短，对卡那霉素敏感，合适的筛选浓度为100 mg?L－1#65377;以吉林小粒1号胚芽尖为外植体，将植物表达载体w10通过农杆菌(LBA4404)导入吉林小粒1号，在农杆菌中孵育6 h，筛选培养基上重生芽发生频率高，成功获得了再生植株#65377; 　　关键词：大豆组培；胚芽尖；子叶节；胚轴 　　中图分类号：S565．1；Q78文献标识码：A文章编号：0439－8114(2008)06－0615－04 　　 　　A Pilot Study of An Soybeans Embryonic Tip Regeneration System 　　 　　SUN Wen－li1，2，3，LIU Yu－hui2，3，WU Yuan－hua1，FU Jun－fan1 　　(1．Plant Pathology Department， Shenyang Agriculture University， Shenyang 110161，China； 　　2．Biotechnology Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100081，China； 　　3．Important Scientific Engineerings of Crops Gene Resources and Gene Improvement of China，Beijing 100081，China) 　　 　　Abstract： In order to improve the quality of Jilinxiao No．1，the embryonic tip regeneration system was set up according to the method of Wei－Zhi－ming． The differences of the multiple shoot frequency amang embryonic tip， cotyledonary node and hypocotyl segment was compared with statistic analytical method． The result indicatd that embryonic tip had the highest frequency multiple shoot and the shortest time to get it． The embryonic tip was sensitive to kanamycin and the suitable concentration was 100 mg?L－1． The high frequency multiple shoot could be gained when the embryonic tip was incubated in LBA4404 for 6 h． The regeneration plants of Jilinxiaoli1 transformed the w10 with the embryonic tip by LBA4404 were obtained． 　　Key words： soybean tissue culture； embryonic tip； cotyledonary node； hypocotyl segment 　　 　　建立一个良好的组培再生系统，是大豆遗传转化成功的前提#65377;目前研究再生频率比较高的再生体系有子叶节#65380;胚轴和胚芽尖[1，2]#65377;由于子叶节具有取材不受季节限制#65380;诱导再生快#65380;转化突变率低等优点，得到了广泛的应用#65377;Zhou等[3－8]用子叶节为受体分别将几丁质酶基因#65380;Bt基因#65380;玉米转座子Ac基因，SMV－CP基因等转入Peking等大豆品种中#65377;但也存在再生频率低#65380;受基因型限制#65380;转化株的嵌合体等问题#65377;胚轴作为外植体，是目前研究应用较多的农杆菌转化受体，有许多成功的转化事例#653