蛋白质分子基础3-蛋白质制备幻灯片.pptVIP

蛋白质化学 蛋白质的层析分离 根据物质在固定相和流动相中的分配系数的不同，使分配系数只有微小差异的物质获得最大的分离效果。 根据两相状态，分为： 气相层析和固相层析 根据层析机理，分为： 吸附层析、离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析 层析法的一般原理 溶质在两个互不相溶的溶剂中，它在固定相和流动相中的浓度比是一个常数，称为分配系数，这就是分配定律： 或用溶质在两相中的体积表示： 塔板理论 柱子的分离效率在一定条件下主要决定于塔板数的多少,柱子的塔板数主要依赖于柱长和理论塔板高度: N=L/H=16(Ve/W)2 H:理论塔板高度 Ve: 洗脱体积 W:峰宽 D值一定的条件下,提高柱效: (1)增加柱长 (2)降低理论塔板:降低流速和支持物的颗粒度 离子交换层析 原理:根据蛋白质分子所带电荷的不同来达到分离的目的. 经化学反应将解离集团引入到惰性支持物上,通过不同的电荷来分离分子。 解离离子带负电， 结合阳离子，称为阳离子交换柱。 带正电， 结合阴离子，称为阴离子交换柱。 注: pH在等电点处,分子的净电荷为0,无相互作用; pH在等电点以上,分子带负电,可结合于阴离子交换剂; pH低于等电点