猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法建立.pdfVIP

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2018-09-02 发布于未知
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猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法建立.pdf

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中国兽医科学，（）：７２３７２７　ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒＳｃｉｅｎｃｅｙ中图分类号：文献标志码：文章编号：（）Ｓ８５２．６５９．４Ａ１６７３４６９６２００９０８０７２３０５　　猪轮状病毒双抗体夹心犈犔犐犛犃检测方法的建立  黄小波，徐璐，曹三杰，文心田，曾燕，余慧　　　（四川农业大学动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室，四川雅安　６２５０１４）摘要：用差速离心法纯化的猪轮状病毒（）分别免疫仔猪和兔，制备了猪抗和兔抗超免疫血ＲＶＲＶＲＶ　　清，并用层析方法进行了纯化，建立了检测ＲＶ的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。结果表明，该双抗体夹心的最佳反应条件为：猪抗包被浓度为／，兔抗最佳工作浓度为／，ＥＬＩＳＡＲＶＩＧ４ｍＬＲＶＩＧ３．５ｍＬｇ μｇｇ μｇ样品反应时间为，酶标抗体工作浓度为，以作为阳性判定标准。该的９０ｍｉｎ１∶８０００犇４５０ｎｍ≥０．１６１ＥＬＩＳＡ重复性变异系数小于，最低检测限为／，并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病１０％１．２５ｍＬ μｇ毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应，该ＥＬＩＳＡ试剂在室温和４℃条件下至少可保存个月。用该方法和金标检测卡检测份临床粪便样品，结果显示，的阳性检出率４ＥＬＩＳＡＲＶ７０ＥＬＩＳＡ为２２．９％，而金标检测卡的阳性检出率为２０．０％。表明，建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点，可用于ＲＶ的快速检测。关键词：猪轮状病毒；双抗体夹心酶联免疫吸附试验；检测；建立犇犲狏犲犾狅犿犲狀狋狅犳犪犱狅狌犫犾犲犪狀狋犻犫狅犱狊犪狀犱狑犻犮犺犈犔犐犛犃犳狅狉犱犲狋犲犮狋犻狅狀狆狔狅犳狅狉犮犻狀犲狉狅狋犪狏犻狉狌狊狆，，，，，ＨＵＡＮＧＸｉａｏｂｏＸＵＬｕＣＡＯＳａｎｉｅＷＥＮＸｉｎｔｉａｎＺＥＮＧＹａｎＹＵＨｕｉｊ（／犓犲犔犪犫狅狉