红曲霉发酵洛他汀的一些研究.pptVIP

酵母破壁液添加量对洛伐他汀产量的影响 由图 5-5 可以明显看出，酵母破壁液能够显著促进红曲霉的菌体生长能力。在添加量为 1.5 mL 时，洛伐他汀产量能够达到最大值，约为 329.01mg/L。 酵母破壁液对红曲霉发酵生长及洛伐他汀产量的影响 从图 5-6 能够看出，酵母破壁液的添加能够极大促进红曲霉生物量的提高和次级 代谢产物洛伐他汀的合成分泌，其中红曲霉生物量提高到 40.56 g/L，较对照组提高了0.45 倍。洛伐他汀产量在红曲霉培养第 13 d 达到最大值，较对照组洛伐他汀产量达到最大值的时间提前了 2 d，最高产量约为 334.01 mg/L，与对照组相比提高了 1.32 倍。 通过考察酵母诱导剂类型、酵母细胞培养的不同时间、诱导剂添加时间以及添加量等因素对红曲霉生长及代谢的影响，确定了最佳诱导培养参数：酵母诱导剂类型为酵母破壁液，酵母细胞作为诱导剂的最佳培养时间为 2 d，诱导剂添加时间为红曲霉发酵的第 0 d(即初始培养时)，添加量为 1.5 mL。 由于酵母破壁液的诱导，使洛伐他汀达到最大产值的时间由对照组的 15 d 缩短为13 d，极大节省了发酵过程中的生成成本。最终得到洛伐他汀产量为 334.01 mg/L，较对照组提高了 1.35 倍。 红曲霉洛伐他汀的发酵 目录 1、实验菌种 2、发酵培养基及发酵条件优化 3、酵母菌对洛伐他汀的诱导作用 菌种的分离结果 选取红米、红腐乳、泡菜、土壤等红曲普遍存在的样品作为筛选样本，并利用红曲霉嗜乳酸、嗜乙醇的特性，通过选择性培养基有针对性的对红曲霉进行筛选培养。最终通过形态学鉴定，初步鉴定得到 18 株红曲霉。 菌种的分离结果 不同红曲霉菌株的洛伐他汀产量 发酵培养基及发酵条件优化 在发酵合成过程中发现，培养条件对产物的合成积累至关重要。 碳源和氮源作为限制性底物对红曲霉发酵过程至关重要，是决定比细胞生长速率和产物积累量的主要因素。 碳源不足会易引起菌体的衰老和自溶；氮源不足会导致菌体生长缓慢，氮源过多，则微生物生长过于旺盛，不利于代谢产物的积累 碳源对洛伐他汀产量的影响 本试验选用以下五种碳源进行比较：葡萄糖，蔗糖，麦芽糖，淀粉，甘油，乳糖。 碳源浓度对洛伐他汀产量的影响 氮源对洛伐他汀产量的影响 氮源种类对洛伐他汀产量的影响 氮源浓度对洛伐他汀产量的影响 由图 4-4 可知，黄豆粉的添加量对色素的产生能力影响不大，而对洛伐他汀的产生积累有较大影响，在 3 g/L黄豆粉添加量时，洛伐他汀产量达最大值，约为 123.52 mg/L。 培养基初始 pH 值对洛伐他汀产量的影响 培养基中的酸碱性会对微生物生长有显著影响，可以影响菌体对基质的利用速率、菌体生长速率、细胞的结构状态和菌体细胞膜的电荷状况等，同时影响发酵过程中各种酶活，从而影响代谢产物的变化以及代谢产物的稳定性。此外，在发酵过程中，pH 值也会引起细胞膜通透性以及菌体形态的变化，进一步影响菌体对养分的吸收和代谢产物的分泌过程。 微生物在利用营养物质时，由于酸碱性物质的合成积累或代谢酸物质的生成，能够使培养环境中的酸碱性发生变化。在配制发酵培养基时，pH 值对细胞生长以及代谢产物的影响也要重点考虑。 由图 4-5 可知，菌株积累洛伐他汀与色素的能力在酸性条件下为宜。当 pH 值为5.0 时，洛伐他汀的产量达到最大值，约为 132.54 mg/L，当 pH 值继续升高时，洛伐他汀产量下降幅度较大。 培养条件对红曲发酵产洛伐他汀的影响 培养温度对洛伐他汀的影响 由图 4-6 所示，当温度低于 28℃时，低温会抑制红曲霉细胞的生长，因此直接影响了洛伐他汀的生成量。当温度达到 28℃时，细胞有较好生长温度，能够快速生长，并且在该温度条件下，洛伐他汀的合成量达到最大值，约为 135.35 mg/L。 菌丝接种量对洛伐他汀的影响 菌丝接种量往往能够直接影响产物的生成量和发酵的经济成本。菌丝接种量较小时，发酵前期菌体生长慢，使发酵周期延长，增加生产成本；菌丝接种量较大时，发酵初期菌体生长较快，会使发酵液粘度增加，导致溶氧不足或基质匮乏，也会使洛伐他汀的合成量下降。 由图 4-7 可知，接种量＜10%时，洛伐他汀产量较低，说明此阶段菌种未生长完全，需要延长发酵时间；接种量较高(＞10%)时，洛伐他汀产量受到显著抑制。因此，试验选用 10%接种量参数较为适宜。 溶氧量对洛伐他汀的影响 由图 4-8 可以看出， 溶氧量较低时，由于菌丝体的生长速率被限制，会进一步影响菌体的产酶代谢，致使洛伐他汀及色素产量下降。较高溶氧量利于洛伐他汀的合成积累，当溶氧量达到 96.7%左右时，洛伐他汀产量最高，约为 127.37 mg/L。 培养时间对细胞生长及代谢产物的影响 从图中可