2.2.2细胞融合和单克隆抗体-修改版-新人教版选修3幻灯片.pptVIP

4、单克隆抗体的应用 * 2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体 知识回顾：植物体细胞杂交的过程 能不能用类似的方法，让不同种动物的体细胞杂交呢？ 物理法： 化学法： 生物法： 离心、振动、电刺激 聚乙二醇（PEG） 　灭活的病毒 (一)动物细胞融合（细胞杂交） 1.动物细胞融合：也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2.杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 3.动物细胞融合的方法： 用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程： 用灭活病毒诱导动物细胞融合的原理：P52（生物技术资料卡） 4.动物细胞融合技术的优点： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 5.动物细胞融合技术的用途： 用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育以及制造单克隆抗体。 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 用 途 诱 导 方 法 融合前处理 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ （二）单克隆抗体的制备 思 考：如何获取某种特定抗体？ 1、抗体的传统生产方法 再从动物血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 输入 浆细胞 动物体内 某抗体 某抗原 思考与探究： 如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？ 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交瘤细胞 既能分泌一种特异性抗体 又能无限增殖 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想： 2、单克隆抗体的制备过程 思考与探究： 如何获得能产生特异抗体的杂交瘤细胞呢？ 2、单克隆抗体的制备过程 自学与思考： 1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？ 为什么要这样处理？ 2）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？ 3）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？ 4）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交 瘤细胞具有什么特点？ 5）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？ 多种杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 单抗的制备过程要点： 1.分离B淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列（B1,B2,B3,---Bn）。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 2.细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 3.第一次筛选：在“特定的选择培养基”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 4.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 5.选择所需要的杂交瘤细胞克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 6.提取单克隆抗体。 （3）整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合? 小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖， B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。 2、骨髓瘤细胞是癌细胞吗? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。 ※知识拓展： 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通