S-periaxin蛋白分子聚合状态的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

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S-periaxin蛋白分子聚合状态的研究-生物化学与分子生物学专业论文

万方数据 万方数据 学位论文使用授权声明 学位论文使用授权声明 本人完全了解山西大学有关保留、使用学位论文的规定,即: 学校有权保留并向国家有关机关或机构送交论文的复印件和电子文 档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等手段保 存、汇编学位论文。同意山西大学可以用不同方式在不同媒体上发 表、传播论文的全部或部分内容。 保密的学位论文在解密后遵守此协议。 作者签名: 导师签名: 年 月 日 46 目 录 中 文 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 综述1 1.1 腓骨肌萎缩症1 HYPERLINK \l _TOC_250001 轴突周围蛋白(periaxin) 4 periaxin 的定位、分布 4 L- periaxin 的结构与功能 5 S-periaxin 的结构与功能 6 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.3 蛋白-蛋白相互作用元件-PDZ domain 7 1.4 本研究的目的与意义8 参考文献8 第二章 S-periaxin 蛋白的表达纯化 13 2.1 前言13 2.2 实验材料13 2.2.1 实验仪器13 2.2.2 分子生物学试剂13 2.2.3 菌株和质粒13 2.3 实验方法13 2.3.1 S-periaxin 蛋白表达载体构建 13 2.3.2 S-periaxin 及其突变体重组蛋白的表达与纯化 15 2.4 实验结果16 2.4.1 PCR 扩增 S-periaxin 基因 16 2.4.2 His-S-periaxin 及其突变体蛋白的表达与纯化 16 2.5 讨论18 参考文献19 第三章 体外 S-periaxin 蛋白二聚化的分析21 3.1 前言21 3.2 实验材料21 3.2.1 细胞系21 3.2.2 菌种和质粒21 3.2.3 主要的生化试剂21 3.2.4 实验仪器22 3.3 实验方法22 3.3.1 戊二醛交联22 3.3.2 非还原性 SDS 22 3.3.3 免疫共沉淀研究 S-periaxin 蛋白之间的相互作用 22 H2O2 处理 His-S-periaxin(WT 和 Mutants)蛋白 23 DTT 处理 His-S-periaxin(WT)蛋白 24 3.4 实验结果24 3.4.1 戊二醛交联24 3.4.2 S-periaxin 形成系列聚合物 24 3.4.3. S-periaxin 蛋白形成同源二聚体 25 3.4.4 半胱氨酸残基 Cys 参与 S-periaxin 蛋白分子间二硫键的形成 26 3.5 讨论27 参考文献28 第四章 双分子荧光互补研究 S-periaxin 蛋白间的相互作用 30 4.1 前言30 4.2 实验材料30 4.2.1 菌种和质粒30 4.2.2 主要的化学试剂31 4.2.3 实验仪器31 4.3 实验方法31 4.3.1 双分子荧光互补系统的构建31 4.3.2 双分子荧光互补实验载体的构建32 4.3.3 原核双分子荧光互补系统的验证33 4.3.4 原核双分子荧光互补 BiFC 实验 33 4.3.5 Western blotting 34 4.3.6 真核双分子荧光互补 BiFC 实验 34 4.4 实验结果35 4.4.1 mCherry 双分子荧光互补系统 35 4.4.2 GFP 蛋白间互作介导断裂 mCherry 两个多肽片段重新组合发出 荧光 36 4.4.3 原核 BiFC 证实 S-periaxin 蛋白同源互作 37 4.3.4 原核 BiFC 系统中重组蛋白均可溶性表达 38 4.3.5 真核 BiFC 证实 S-periaxin 蛋白同源互作 39 4.4 讨论40 参考文献40 攻读学位期间取得的研究成果42 致谢43 个人简况以及联系方式44 承诺书45 学位论文使用授权声明46 Contents Chinese Abstract I ABSTRACT III Chapter1 Reviews 1 Charoct-Marie-Tooth 1 periaxin 4 Distributions and localizations of periaxin 4 Structure and function of L-periaxin 5 Structure and function of S-periaxin 6 Protein-Protein Interaction Module-PDZ domain 7 Purpose and signification of this study 8 References 8 Chapter2 Expression and purification of S-

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