STK1基因的功能研究-植物学专业论文.docxVIP

摘 要 由玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）引起的玉米大斑病是威胁玉米生产安全的重 要病害之一，常造成严重经济损失。研究表明，许多植物病原真菌的生长、发育及致病 性都受到细胞信号转导途径的调控，其中 MAPK 信号转导途径是普遍存在的并有重要 调控作用的信号转导途径。玉米大斑病菌中的 STK1 基因是编码 MAPK 信号途径中 MAP kinase 一个基因，本实验室前期研究发现该基因与大斑病菌的致病性和分生孢子萌发有 关，但该基因参与玉米大斑病菌渗透调节的具体作用尚不明确。本试验在克隆 STK1 基 因的基础上，对其进行了生物信息学的分析，发现它与其他真菌的渗透调节相关的 MAP kinase 基因具有很高的同源性。为了进一步明确该基因的功能，本实验采用功能互补的 方法，构建了酿酒酵母胞内表达载体，使该基因在酿酒酵母 HOG1 基因缺失突变体中表 达，以进一步明确 STK1 基因的功能。主要结果如下： 1. 获得了 STK1 基因全长序列，并最终确定一个全长为 1071 bp 的开放阅读框（Open Reading Frame，ORF）。对 STK1 基因的开放阅读框进行了生物信息学分析，利用相关 软件对该基因进行翻译，发现该基因编码 356 个氨基酸的蛋白。经对该基因的预测蛋白 进行同源性分析，发现预测蛋白与许多植物病原真菌渗透调节相关的 MAP kinase 都有 90%以上的同源性；通过比对发现，该蛋白与这些真菌中 MAP kinase 相似，含有渗透胁 迫相关的 MAP kinase 所具有的保守结构域：TGY motif、CD domain、BD domain。其中， 171～173 位的 TGY motif 是渗透相关的 MAP kinase 的典型特征，CD domain 和 BD domain 是 MAP kinase 上游调节物和下游效应物的结合和催化部位；聚类分析将不同的 MAP kinase 分为 3 个不同的类群，即 Hog1、Fus3/Kss1 和 Slt2，其中 Stk1 与 Hog1 类群 聚类在一起。 2. 构建了酿酒酵母表达载体 pVT102U-STK1，进而以该重组质粒转化酿酒酵母 HOG1 基因缺失突变体，通过酿酒酵母相关的氨基酸合成缺陷筛选及 PCR 验证获得了 阳性转化子。 3. 对获得的转化子进行了多种胁迫处理，发现在盐胁迫下该基因能够恢复酿酒酵母 HOG1 缺失突变体对盐的敏感性，并能恢复其异常的的细胞形态至正常的表型。并能恢 复 HOG1 缺失突变体对氧胁迫的敏感性，说明 STK1 基因具有抵抗氧胁迫的的作用。 4. 研究发现，STK1 基因不仅能够抵抗各种盐胁迫，其转化子在钠盐胁迫下的生长 速度及胞内甘油的累积高于野生型，说明该基因对钠胁迫的耐受力更强。由于盐碱土壤 中钠盐为主要的盐类，所以我们希望该基因能够尽早转入到植物体内来提高植物的抗盐 能力，从而为大量废弃盐碱土壤的利用提供遗传资源。 关键词： 玉米大斑病菌；MAPK；STK1 基因；渗透调节；钠胁迫 Functional Characterization and Identification of STK1 Gene Encoding a MAP Kinase in Setosphaeria turcica Author: Li Po Supervisor: Dong Jingao Major: Botany Abstract Northern Corn Leaf Blight (NCLB), caused by Setosphaeria turcica which is a fungal plant pathogen, is a serious threat to maize production in North and Northeast China. It was reported that the growth, development and pathogenicity were regulated by cellular signal transduction in many fungi, MAP kinase signal transduction pathway, a universal pathway, have an important role in the ability of fungal plant pathogen to perceive changes in their environment and adjust their intracellular activities to regulate growth and development proces