色谱联用术及应用.pptVIP

主要取决于核磁共振技术的提高和发展 （1） 灵敏度 高频仪器的使用 NMR的信噪比与磁场强度的平方成正比，800 MHz (18.79T)与100 MHz (2.35T)仪器相比，信噪比增大约64倍。 操作参数的影响 HPLC的峰宽 峰宽（体积）≤ NMR检测线圈长度。 合适的LC柱的负载量 内径4.6mm色谱柱，合适的负载量为100?g。 采用停流技术 增加检测的有效时间。 （2）溶剂峰的抑制—关键技术 使用氘代溶剂 使用脉冲序列等 采用WET序列进行溶剂峰抑制的实例 乙腈溶剂峰 实验布局 泵、注入阀、色谱柱和紫外检测器组成的LC系统，通过一条2～2.5m的特制毛细管连接到NMR液相探头上，探头底部有阀控制NMR测定方式。 液相探头带有一个流动腔； 射频发射线圈垂直固定在流动腔的玻璃管上； 接受线圈平行于玻璃管； 流动腔不能旋转，NMR测定分辨率较差。 连续流动模式 LC的载液带着试样组分连续不断流入NMR的流动腔，NMR仪器用溶剂峰抑制技术采集NMR谱图，得到化学位移－LC保留时间的假二维谱。得到的谱图分辨率和信噪比差。 停流技术（时间切割谱） 当色谱峰的最高点到达流动腔的检测位置时，关闭液相探头底部的进口阀，同时LC的泵停止工作，NMR进行采样直到获得满意的谱图 。 峰存储模式( peak parking ) 实际上是一种离线模式。 由LC流出的峰存储在毛细管回路中，然后通过适当的阀系统依次送入NMR探头中进行NMR测定，LC分析过程不中断。 体系中有三个阀，12个存储峰的毛细管回路，整个过程由计算机控制。 峰存储模式 流动模式：灵敏度和信噪比差，适合于测定富核，如1H、19F、31P和富集的13C、15N；对1H最小检测量（16次累加）为10?g（500MHz），30?g（300MHz）； 停流模式：有较好的灵敏度，可测1H、13C、15N等。最小检测量1H为1?g； 峰存储模式：与停流模式类似。 通过尿样分析研究代谢产物 测定条件： C18柱，可变波长检测器(210～240nm)；梯度洗提 A－重水，B－乙腈2～45％ 进样量和流量 流动模式 70?L，0.5mL/min 停流模式100 ?L，1mL/min 停流模式还可测定二维谱 （五） 色谱-傅立叶变换红外光谱联用 (GC-FTIR) 1.GC-FTIR概述 MS一般难于区分同分异构体，单凭MS确定有机物结构有时很困难，甚至不可能。 实现GC-IR的困难 除了工作气压匹配之外，其余工作条件的差异很大。尤其是散射型红外光谱仪，扫描速度和灵敏度远远低于色谱。 FTIR的出现大大促进了GC-IR的发展。FTIR具有光通量大、信噪比好、扫描速度快等优点，与GC的匹配性大大提高。 FT－IR光学台 光管 数据系统 GC MCT检测器 GC－FT系统的示意图 GC-FTIR接口示意图 用硼硅玻璃制成； 两端装有KBr盐窗，红外干涉光可以通过； 内壁镀金，有高的反射率，红外干涉光在其中多次反射，增加光程以提高灵敏度； 可加热，保证GC流出物不在此冷凝、聚集 适当的容积，以获得最佳分辨率和灵敏度 光管的体积等于或小于色谱峰平均半宽体积，即V1/2≥ V光管 时，能获得最佳分辨率和灵敏度。 光管的规格： 2～3(i.d.)×600～400(l)mm 适合于填充柱 1(i.d.)×100～400(l)mm 适合于毛细管柱 尾吹装置：用以解决GC柱（i.d. 0.25mm）与传输线（i.d. 2mm）、光管(id 1～2mm)中线速变化的问题。即柱外效应的问题 (1)三维实时显示图 波数 时间 吸光度 指定官能团频率范围对时间所作的图； 是一个“色谱图”，每个峰代表一个组分； 包含的信息比一般的色谱图多，它体现了化合物类型或所含官能团的信息； 与GC-MS中的质量色谱图作用相似。 1200～1100 1600～1500 1780～1680 3050～2950 3650～3550 乙醇、丙酮、乙酸乙酯和苯的混合物的化学图 GC-FTIR采集的数据经计算机处理后得到的红外吸收信号对时间所作的图。 积分吸收重建图(红外总吸光度重建图 TIA)，相当于GC-MS中的总离子流图(TIC)。 Gram-Schmidt重建色谱图 扣除了载气背景的积分重建图。 最大重建色谱图 对每个峰的最大吸收进行积分重建,相当于GC-MS中的RTIC图。 积分吸收重建图 Gram-Schmidt重建色谱图 乙醇 丙酮