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第七讲 酶的非水相催化 讲课：阳飞 酶的非水相催化 7.1 酶催化反应的介质 酶非水相催化的类型 1、有机介质中的酶催化 2、气相介质中的酶催化 3、超临界介质中的酶催化 4、离子液介质中的酶催化 1、有机介质中的酶催化 指酶在含有一定量水的有机溶剂中进行的催化反应。 适用对象：底物、产物两者或其中之一为疏水性物质 优点： ①酶在有机介质中酶分子的构象表现出比水溶液中更具“刚性”； ②有机介质中酶的稳定性得到显著提高； ③由于有机溶剂的存在，大大降低许多需要水参与的副反应； ④可以省略产物的萃取分离过程，提高收率。 2、气相介质中的酶催化 酶在气相介质中进行的催化反应。 适用对象：底物是气体或者能够转化为气体的物质 由于气体介质的密度低，扩散容易，因此酶在气相中的催化作用与在水溶液中的催化作用有明显的不同特点。 3、超临界介质中的酶催化 酶在超临界流体中进行的催化反应。 超临界流体：指物质状态超过临界点后的流体。 超临界流体的物理特性和传质特性通常介于液体和气体之间，黏度大大低于液体的黏度，接近气体的黏度，有利于物质的扩散；其扩散系数接近于气体，是通常液体的近百倍，可迅速渗透到物体的内部而溶解目标物质，快速达到萃取平衡。 4、离子液介质中的酶催化 酶在离子液中进行的催化作用 离子液（ionic liquids）是由有机阳离子与有机（无机）阴离子构成的在室温条件下呈液态的低熔点盐类，挥发性低、稳定性好。 酶在离子液中的催化作用具有良好的稳定性和区域选择性、立体选择性、键选择性等显著特点。 7.2、有机介质反应体系 1、非极性有机溶剂—酶悬浮体系 用非极性有机溶剂取代所有的大量水，使固体酶悬浮在有机相中，但仍然含有必需的结合水以保持酶的催化活性(含水量一般小于2%)； 酶的状态可以是结晶态、冻干状态、沉淀状态或者吸附在固体载体表面上 2、与水互溶的有机溶剂—水单相均一体系 有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系，酶、底物和产物都能溶解在体系中 3、非极性有机溶剂—水两相/多相体系 由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶剂相所组成的两相体系 4、胶束体系 胶束体系 胶束也称为正胶束或正胶团，是在大量水溶液中含有少量与水不相混溶的有机溶剂，加入表面活性剂后形成的水包油(0／W)的微小液滴。表面活性剂是由亲水憎油的极性基团和亲油憎水的非极性基团两部分组成的两性分子，既能溶解水溶性物质又能增溶疏水性物质。 正胶束是通过表面活性剂的极性端朝外，与水结合，非极性端朝内，有机溶剂包在液滴内部，形成一个非极性的核心形成，如图(a)所示。正胶束体系中水相是连续相，有机相(油相)是分散相。酶催化反应时，酶在胶束外面的水溶液中，疏水性的底物或产物在胶束内部，反应在胶束的两相界面中进行。 反胶束是由水／表面活性剂／有机溶剂所组成的低水含量的油包水(W／O)微乳液。它是一个宏观均匀、微观多相的热力学稳定体系，该体系是一种两亲介质，既能溶解水溶性物质又能增溶疏水性物质，其中有机相(简称油相)是连续相，水相是分散相，油相与水相之间通过表面活性剂单分子层隔开形成球状的反胶束微粒，如图 (b)所示。 反胶束体系 ①溶剂：非极性有机溶剂，常用的是六碳以上的直链及支链烷烃、部分芳香族化合物及卤代烷烃（辛烷、氯仿、二乙醚），其中正辛烷或异辛烷用得最多； ②表面活性剂：阳离子型(CTAB：溴化十六烷基三甲基胺)、阴离子型(AOT：2-乙基己基-琥珀酸酯磺酸钠)、非离子型（Tween系列）。 ③反胶束微粒的大小：取决于反胶束的含水量(Wo)。Wo的定义为反胶束中水分子数与表面活性剂分子数之比，也即有机溶剂中水的摩尔浓度与表面活性剂的摩尔浓度之比。反胶束体系中的水通常可分为结合水和自由水。结合水是指位于反胶束内部形成水池的那部分水；自由水即为存在于水相中的那部分水。研究表明不同的酶有不同的最适Wo值，该值取决于表面活性剂和酶的性质，即反胶束的内核体积与酶分子体积要相适应。酶活力与W。的关系一般符合钟形曲线。 ④反胶束体系的优点： 具有组成灵活、热力学稳定（漆酶在反胶束体系中的活性约为水中的60倍；过氧化物酶约为水中的100倍，而酸性磷酸酶约为水中的200倍）； 界面积大、可通过相调节来实现产物回收，既能为反应物和产物提供有机相，又能为酶分子维持其活性提供稳定的微环境. 反胶束体系的应用 近年来受到人们的普遍关注，其中研究最多的是肽的合成和脂肪酶的催化反应： Xing等研究了AOT／正辛烷的反胶束体系中，α-胰凝乳蛋白酶催化合成肽衍生物的反应得到56％～88％的产率，而且还对反应体系的Wo值、反应时间和酶浓度等条件进行了讨论； Chen等在反胶束体系中用不同的蛋白酶合成了二肽； Tsai等研究了AOT／异辛烷／