TLR3活化对人骨髓间充质干细胞造血支持功能的影响及其机制分析-内科学(血液病)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 英文缩略词表 英文简称 HSCs 英文全称 Hematopoietic stem cells 中文释义 造血干细胞 MSCs Mesenchymal stromal cells 间充质干细胞 TLRs Toll-like receptors Toll 样受体 GVHD Graft versus host disease 移植物抗宿主病 HSPCs Hematopoietic stem/progenitor cells 造血干祖细胞 TNCs Total nucleated cells 总有核细胞 MNCs Mononuclear cells 单个核细胞 UCB Umbilical cord blood 脐带血 HSP Heat shock protein 热休克蛋白 HMGB1 High mobility group box 1 高迁移率族蛋白 B1 CFC Colony forming cell 克隆形成细胞 CFU Colony forming unit 克隆形成单位 CSF Colony-stimulating factor 集落刺激因子 IL Interleukin 白细胞介素 LPS Lipopolysaccharide 脂多糖 PAMPs Pathogen-associated molecular patterns 病原相关分子模式 LRR Leucine-rich repeat 亮氨酸重复序列 SCF Stem cell factor 干细胞因子 UCBT Unrelated cord blood transplantation 非血缘脐血移植 BMT Bone marrow transplantation 骨髓移植 PBT Peripheral blood transplantation 外周血移植 GVL Graft-versus-leukemia 移植物抗白血病 TLR3 活化对人骨髓间充质干细胞造血支持功能的影响 及其机制研究 中文摘要 背景和目的：间充质干细胞（mesenchymal stromal cells, MSC）是一种具有高度自 我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。Toll 样受体（Toll-like receptors, TLRs） 是近几年来发现的一类天然免疫受体，在激活天然免疫和获得性免疫中发挥及其 重要的作用。最新研究表明 TLRs 可表达于 MSC 表面，并且可以调节其免疫调节、 迁移、损伤组织修复等多种生物学功能。在正常生理或病理状态下，MSC 作为构 成造血微环境的主要细胞成分，骨髓 MSC 通过与造血细胞直接接触、分泌细胞外 基质及多种细胞因子维持造血微环境结构和功能的完整性，进而实现对造血的精 细调控。MSC 参与造血生成，但迄今为止，TLR 受体对 MSC 造血支持功能的调 控尚不清楚。前期工作中，我们首次证实 TLR2 和/或 TLR4 活化的人骨髓 MSC 可 促进人脐血 CD34+细胞的增殖和向髓系分化，这一作用可能与 Pam3CSK4 和 LPS 显著上调 MSC 造血相关细胞因子的分泌有关。本课题中，我们将继续观察 TLR3 活化对人骨髓来源的 MSC 支持人脐血造血干/祖细胞增殖和分化能力的影响，并对 MSC 分泌的造血生长因子加以检测，探讨 TLR3 活化的 MSC 调控人脐血造血干/ 祖细胞增殖分化的可能机制。 方法 ： 应 用 Ficoll 法 体 外 分 离 培 养 健 康 供 者 的 骨 髓 来 源 的 间 充 质 干 细 胞 （BM-MSC），流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面 CD29、CD31、CD34、CD45、 CD73、CD90、CD105、CD166 及 HLA-DR 的表达，并利用体外诱导分化实验检 测 BM-MSC 的成脂及成骨分化能力，鉴定 MSC。应用流式细胞术分析其表面 TLR3 的表达水平。利用 TLR3 激动剂（POLY（I:C））刺激 BM-MSC，MACS 磁珠分 选系统分离出来足月产儿新鲜脐血的 CD34+ 造血干细胞，将分选的 CD34+与 BM-MSC 共培养，收集不同培养时间点的细胞，进行克隆形成实验和有核细胞计 数，并利用流式细胞术分析扩增后细胞的多种分化指标（CD3、CD19、Gly-a、CD41a、 CD33、CD11b、CD14）的表达情况；了解 TLR3 的活化对 BM-MSC 支持 CD34+ 造血干祖细胞增殖和分化的影响。同时应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测 POLY （I:C）活化 BM-MSC 同时间后，多种造血相关生长因子（IL-1、IL-6、IL-8、IL-11、 SCF 、G-CSF、GM-CSF、M-CSF）分泌