小型凝胶渗透色谱净化系统在农残检测中应用.docVIP

小型凝胶渗透色谱净化系统在农残检测中应用 　　摘 要 本文对小型凝胶渗透色谱净化（GPC）系统在农残检测中的应用进行研究，优化净化条件，包括净化柱选择和不同流动相比较。样品采用乙腈-乙酸乙酯混合溶剂均质提取，经GPC净化后由气质联用仪（GC-MS）检测。采用规格为2.0mm ×150mm的GPC净化柱，流动相为环己烷-乙酸乙酯（1：1），流速0.1mL/min，单个样品净化时间在10min以内，溶剂用量不到常规GPC消耗量的10%，样品处理效率提高2～4倍。本方法平均加标回收率74.67%～109.20%，方法重现性良好，解决常规GPC净化应用中溶剂消耗量大的实际问题，可达到更为环保的效果。 　　关键词 凝胶渗透色谱 净化 溶剂消耗量 农残 　　概 述 　　凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography，简称GPC）技术是一种相对分子质量及其分布的快速测定方法，其分离原理基于体积排阻，按照化合物的分子量不同从大到小顺序出峰。GPC应用范围逐步从生物化学、高分子化学、无机化学向其他领域渗透，目前已成为国际公认的农残分析中有效的净化手段，被列入多项标准中，如《AOAC Method No.984.21 动物脂肪中的有机氯农药残留检测》、《EN 12393食品中农药多残留检测 气相色谱法》、《GB/T 19650-2006 动物肌肉中478种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》等。GPC技术对于含大分子油脂、色素的样品净化十分有效，并且易于实现自动化操作，可大大缩短样品前处理操作时间和减轻繁杂的手工劳动[1]。 　　目前，GPC净化技术在有机磷、有机氯、拟除虫菊酯以及农药多残留分析中的应用十分广泛[2～8]，商品化全自动GPC净化仪器也已经得到发展，但是在实际应用中往往受到限制，除仪器设备成本之外，溶剂用量大是GPC应用的最大问题[9]。在常规GPC净化方法中，为获得足够灵敏度，往往采用较大规格净化柱（柱直径一般在2.5cm左右），以承受更大的进样量（一般为5mL）。获得洗脱液之后，再经过浓缩步骤，才得到待测样品溶液。虽然增大进样量有助于提高检测方法灵敏度，但洗脱溶剂量消耗也大大增加。一般来说单个样品处理时间约为40min（其中净化收集时间约为18～20min），按流速5mL/min计算，需消耗200mL洗脱溶剂。本文针对以上实际问题，采用小型化净化柱，优化洗脱条件，建立一套更为经济合理、环保的净化方法。 　　1 实验部分 　　1.1 仪器与试剂 　　JMS-Q1000GC气质联用仪，配有电子轰击源（EI）（日本电子株式会社）； FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；T25分散机（德国IKA）；TGL-16-A离心机（上海安亭科学仪器有限公司）；MTN-2800D氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；GPC样品前处理设备（自制）。 　　乙腈：色谱纯；环己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；无水硫酸钠：分析纯；氯化钠：分析纯；农药标准品：敌敌畏、β-六六六、毒死蜱、丙草胺、溴氰菊酯、环氧七氯（JK Scientific Ltd.）。 　　1.2 样品提取 　　称取20g试样（精确至0.01g），放于烧杯中，加入40mL乙腈-乙酸乙酯（1：1）混合溶液，用均质器在15000r/min均质提取1min；加入5g氯化钠和5g无水硫酸钠，再均质提取1min；将提取液转移至离心管中，放入离心机，6000r/min离心5min；取上清液20mL，氮吹浓缩至5mL，待净化。 　　1.3 GPC净化条件 　　净化柱：Shodex CLNpak EV-200（2.0mm×150mm）；检测波长：254nm；流动相：环己烷-乙酸乙酯（1：1）；流速：0.1mL/min；进样量：20μL；开始收集时间：2.9min；结束收集时间：4.9min。得到样品体积200μL，加入5μL环氧七氯内标液（300μg/mL），作为待测样品溶液。采用GC-MS进行后续分析检测。 　　2 结果与讨论 　　2.1 测试样品选择 　　由于GPC净化是基于体积排阻原理，因此在测试净化效果时，选取分子量差异较大的农药品种，包括敌敌畏（分子量220.98）、溴氰菊酯（分子量505.24）。为验证该方法对不同类型农药残留的净化效果，选取测试样品：有机氯类农药（β-六六六）、有机磷类农药（敌敌畏、毒死蜱）、拟除虫菊酯类农药（溴氰菊酯）、除草剂（丙草胺），涵盖GC-MS能检测的绝大部分农药类型。 　　2.2 提取溶剂优化 　　在多农残检测中，最常用的溶剂是乙腈；GPC净化所使用的溶剂通常为环己烷-丙酮或环己烷-乙酸乙酯，两者极性差异大。为此，对提取溶剂进行优化。比较乙腈和乙腈-乙酸乙酯（1：1）提取效