环境微生物之检测-大肠菌类之检测商业快速鉴定法原理利用.DOCVIP

環境微生物之檢測-大腸菌類之檢測 商業快速鑑定法 原理:利用 Chromocult coliform agar培養基中特殊的酵素基質，來檢測水樣中 有無大腸桿菌類 目的:檢驗水樣中的大腸菌類和計算 設備和方法 材料:(一)器材 1.玻璃培養皿 2.定量玻璃吸管(1ml) 3.錐形瓶 4.量筒 5.酒精燈 6.三角彎棒 7.稱藥紙 8.稱藥杓 9.耐熱手套 10.滅菌帶 11.螺紋玻璃試管 12.螺紋試蓋管 13.吸球 (二)儀器 1.恆溫烘箱 2.電磁加熱攪拌器 3.電子分析天平 4.恆溫培養箱 5.菌落計數器 6.無菌操作檯 7.不秀鋼鐵統 8.解剖顯微鏡 方法:將待待測水樣使用10倍稀釋法稀釋到實驗所需倍數，製作Chromocult 　　　　coliform agar培養基，然後使用倒碟法來進行檢驗 試劑與培養基 (一)試劑: 1.無菌稀釋水 2.工業酒精 3.70%酒精 (二)培養基: Chromocult coliform agar , MERCK培養基 配法為1000ml蒸餾水添加26.3g培氧基，煮沸後即可使用 Chromocult coliform agar的配製方法為:每1000ml蒸餾水需26.3g培養基 承裝容器估算為每1個容器須要多少ml培養基 此配置需要幾個容器 因此需要多少ml培養基 26.3/1000(Chromocult coliform agar量)/ (多少ml培養基) 所需量稱之 Chromocult coliform agar量 = 多少g，多少ml蒸餾水 菌種或採樣來源 (一)菌種 無 (二)採樣來源 實驗室前面 實驗步驟 1.熟知產品檢驗之原理，例如藥品內含有哪些基實會與哪些菌之酵素反應， 產生哪些顏色變化。 2.紀錄水樣來源 3.將水樣進行連續稀釋10倍至10-5被所以應有6個濃度，及原液 10-1.10-2.10-3.10-4.10-5 4.培養基配置為26.3g加入1000ml二段水培養皿僅需25ml/個，因此6個濃 度培養皿僅需150ml，記住換算所需量26.3/1000-x/150 5.培養基不能用濕熱滅菌，因此要放置在電磁加熱攪拌器上加熱後放入磁石攪拌沸騰，位安全起見，外圍要放紙箱作阻隔 6.倒碟法 倒碟法 (a)沸騰之培養基，待其冷卻，但不能使其凝固 (b)先將培養基分6個容器中(試管或燒杯) (c)由6個不同濃度之菌落各取出1ml，分別加入上述容器 (d)充分混合均勻後到入空的培養皿中 (e)待其冷卻凝固放置37度培養箱培養，隔天觀察結果。 (f)換算原液每ml之菌數 問題 1.試討論使用Chromocult coliform agar培養基之原理、優缺點及其適用性 答: 原理:使用Chromocult coliform agar培養基中的二種特殊的酵素基質， 其中一基質(salmon-gal)會與大腸菌類特有的半乳糖苷酶(galactosidase) 酵素反應使菌落生成紅色；另一種特殊基質(x-gluc)則會與大腸菌類生 成的葡萄糖苷酶(glucuronidase)酵素反應形成深藍色(或紫色)的菌落；至 於其他腸內菌則因沒有這些特殊的酵素，於此培養基中呈現白或無色 菌落以Chromocult coliform agar培養基檢驗大腸菌類總數為紅色加上深 藍色(或紫色)的菌落數總和 優點：快速、簡單以及準確的檢驗水樣中的大腸菌類。 缺點：只適用於檢測水樣。 2.解釋以Chromocult coliform agar培養基培養大腸菌類之實驗結果，並說 明你們這組培養基上是否有其他非大腸菌類(即其他顏色)的微生物 答:我們這次實驗結果,培養皿中出現許多白色跟無色菌落,所以我們 這組這