山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤抗氧化保护作用.docVIP

山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤抗氧化保护作用 　　[摘要] 目的 探讨山药多糖预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制。 方法 选择健康雄性SD大鼠30只，随机分为3组：假手术组、肾缺血再灌注损伤组、山药多糖预处理组，每组各10只，复制大鼠肾缺血再灌注损伤模型，山药多糖预处理组，于造模前1周给予200 mg/kg山药多糖灌胃。肾缺血再灌注6 h后检测血清尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）的含量，测定肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）的含量。 结果 与假手术组相比，肾缺血再灌注损伤组和山药多糖预处理组血清BUN、SCr含量升高（P 0.01），肾组织SOD、GSH-Px活性降低（P 0.01），MDA含量升高（P 0.01）；与肾缺血再灌注损伤组相比，山药多糖预处理组的血清BUN、SCr含量降低（P 0.01），肾组织SOD、GSH-Px活性升高（P 0.01），MDA水平降低（P 0.01）。 结论 山药多糖预处理能改善肾缺血再灌注损伤，其机制与山药多糖抗氧化作用有关。 　　[关键词] 缺血再灌注损伤；抗氧化；山药多糖 　　[中图分类号] R692.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）03（c）-0021-03 　　肾缺血再灌注损伤（renal ischemia reperfusion injury，RIRI）是临床上经常遇到的问题。肾是高灌注器官，对缺血缺氧比较敏感，因此，如何降低由于RIRI所引起的肾损害，促进恢复已成为一个重要的研究课题。急性RIRI与氧自由基关系密切[1-2]，再灌注引起的氧自由基大量生成而引发的脂质过氧化作用，激发了肾小管上皮细胞的凋亡及坏死[3]，从而影响患者肾功能的恢复。山药多糖是山药的主要活性成分，已有研究证明，山药多糖具有较强的抗氧化活性作用[4-5]，但其防治RIRI方面未见报道。本实验通过复制大鼠RIRI模型，探讨山药多糖对RIRI肾功能的影响及其保护机制，为临床用药提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠30 只，体重 （200±20）g，由湖南中医药大学实验动物中心提供并饲养于湖南中医药大学SPF级动物房，动物合格证号：SCXK（湘）2009-0001。 　　1.1.2 试剂 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所，其余试剂均为国产分析纯。 　　1.1.3 药物制备 淮山药购自湖南中医药大学第一附属医院药剂科。干山药片洗净加双蒸水置40℃浸泡4 h，用匀浆器匀浆，按1∶8加双蒸水40℃提取2 h，用4层纱布过滤冷却后取上清4000 r/min 离心10 min去杂质，于80℃浓缩，加乙醇浓度至80%时多糖析出，静置后出现沉淀，4000 r/min离心10 min，回收乙醇，沉淀用无水乙醇提取3次，冷冻干燥后为灰白色山药粗多糖，用蒽酮法测定山药多糖的含量为18%。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组 将大鼠随机均分为3组，每组10只：①假手术组：麻醉后开腹，分离双侧肾蒂暴露60 min后关闭腹腔。②肾缺血再灌注组：复制RIRI模型[6]。③山药多糖预处理组：复制RIRI模型。术前1周，山药多糖预处理组以200 mg/kg山药多糖灌胃，假手术组和肾缺血再灌注组以等容量生理盐水灌胃，1次/d。 　　1.2.2 复制肾缺血-再灌注损伤模型 术前12 h禁食，自由饮水，腹腔注射1%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉，切除右侧肾脏，以避免右侧肾脏的代偿作用，暴露左侧肾脏并游离肾蒂，夹闭肾动静脉60 min，松开动脉夹后，如果肾脏由紫黑色转为红色说明肾缺血-再灌注模型复制成功，如果松开动脉夹5 min后未变成红色，说明灌注不成功，弃去不用。再灌注6 h后处死动物。 　　1.2.3 血清尿素氮、血清肌酐测定 各组大鼠在再灌注6 h后分别于腹主动脉取血3 mL，3000 r/min离心15 min后分离血清，分装后-70℃ 冰箱保存待测。血清肌酐（Scr）测定采用碱性苦味酸比色法，血清尿素氮（BUN）测定采用二乙酰一肟显色法。 　　1.2.4 肾组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量测定 大鼠处死后取肾组织置于匀浆器中，按重量体积比加入9倍的生理盐水制备成10%的肾组织匀浆，立即放入-20℃冰箱中保存。按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书测定肾组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分