局部注射BDNF对压力性尿失禁模型大鼠LPP及EUS内BDNF影响.docVIP

局部注射BDNF对压力性尿失禁模型大鼠LPP及EUS内BDNF影响 　　【摘要】 目的：探究阴部神经（PN）损伤后局部注入脑源性神经营养因子（BDNF）对压力性尿失禁模型大鼠漏尿点压力（LPP）及尿道外括约肌（EUS）脑源性神经营养因子表达的影响。方法：SD大鼠接受模拟分娩损伤和双侧卵巢切除，并建立压力性尿失禁模型。2周后评估模型建立是否成功。造模成功后，大鼠按照随机数字表法分为三组：BDNF组，损伤PN后局部注入BDNF，缝合后标记部位，第4、6、8天分别于标记部位再次注射；生理盐水组，损伤PN后局部注入生理盐水，量及方法同上；假损伤组，分离PN未损伤。2周后再次进行漏尿点压力及喷嚏实验。随后处死大鼠，取EUS行免疫组化，观察BDNF表达变化。结果：PN损伤后，统计学分析显示，生理盐水组LPP明显低于BDNF组和假损伤组，差异均有统计学意义（P0.05）；HE染色显示，生理盐水组与假损伤组相比，肌纤维断裂及横纹肌排列致密程度均明显下降；免疫组化结果显示，假损伤组括约肌内BDNF含量低，与BDNF组及生理盐水组比较差异均有统计学意义（P0.05）。结论：局部注射脑源性神经营养因子可能通过刺激神经再生从而促进尿道外括约肌的恢复，进而有利于压力性尿失禁大鼠LPP的恢复。 　　【关键词】 压力性尿失禁； 脑源性神经营养因子； 阴部神经； 尿道外括约肌 　　流行病学调查显示，我国尿失禁的总患病率为30.9%，其中压力性尿失禁（stress urinary incontinence，SUI）患病率为18.9%，占总患病率的61%[1]，并且随着人口老龄化，发病人数有所增加。目前SUI发病类型逐渐趋向混合、复杂化，并成为全球关注的新高发疾病[2]。 　　SUI发生时盆底神经发生退行性变化，SUI的女性可见阴部神经对尿道横纹肌和盆底肌肉的传导延迟及对尿道外括约肌失神经支配。大量的动物实验证实，阴部神经损伤与SUI的症状有直接的因果关系[3]。目前SUI的治疗方法有多种，但是从根本上改善神经肌肉的病理生理的治疗方式却并不多见。神经科学研究已经表明，神经营养因子是调节神经生长和存活的一类蛋白质。脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是目前研究较多的一种神经营养因子，它对神经元有促进修复再生及支持、营养、保护的作用。研究发现，BDNF可以提高神经元轴突切断术后的存活。本研究旨在探讨阴部神经损伤后局部注入BDNF对压力性尿失禁模型大鼠漏尿点压力的影响及尿道外括约肌内BDNF表达的影响，为SUI的非手术治疗提供线索。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 健康雌性SD大鼠40只，鼠龄6周，体重240～280 g。造模成功大鼠为36只，按照随机数字表法分为三组：BDNF组、生理盐水组、假损伤组各12只。三组大鼠一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 主要试剂与仪器 重组人脑源性神经营养因子（ProSpec-Tany）、兔抗鼠BDNF抗体（博奥森公司）、SABC（兔IgG）试剂盒（博士德公司）；BL-420生物机能实验系统、BI-2000医学图像分析系统（成都泰盟科技有限公司）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 模型建立与处理 卵巢切除+阴道扩张建立大鼠SUI模型[4-5]。造模2周后进行尿动力学检查及喷嚏实验。测定结束后，造模成功后大鼠按照随机数字表法分为三组，分离PN，用持针器夹住PN两次，每次持续30 s。BDNF组随后用10 μL微量加样器注入2 μL BDNF于神经损伤部位，丝线缝合[6]，随后第4、6、8天分别于标记部位再次进行注射。生理盐水组也同样损伤PN后局部注入生理盐水，量及方法同上。假损伤组分离PN未损伤。注射2周后进行尿动力学检查[7]。 　　1.3.2 标本采集 处死大鼠，取出尿道括约肌组织，用无菌生理盐水冲洗后用4%多聚甲醛缓冲溶液固定24 h，行HE染色和免疫组化染色。 　　1.3.3 图像分析 显微镜观察免疫反应阳性的细胞在肌肉中的分布，BDNF蛋白免疫反应阳性物质呈棕黄色。应用BI-2000医学图像分析系统分析BDNF阳性反应灰度。阳性反应强度用积分光密度值表示。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，LPP数据及积分光密度数值用（x±s）表示，采用单因素方差分析，LSD-t法进行组间比较，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　阴部神经损伤后2只大鼠在实验中死亡，BDNF组及生理盐水组各1只，最后进入统计数据的为34只。 　　2.1 三组HE染色结果的比较 生理盐水组（图C）与假损伤组（图A）相比，尿道全层变薄，结构不明显，肌层萎缩，肌纤维断裂及