山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠心肌中HO1CO系统和iNOSNO系统影响研究.docVIP

山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠心肌中HO1CO系统和iNOSNO系统影响研究 　　[摘要] 目的 探讨山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠心肌中HO-1/CO系统和iNOS/NO系统的影响。 方法 将8周龄SD雄性大鼠40只随机分为Ⅰ组（山楂叶总黄酮治疗组）和Ⅱ组（糖尿病组）各20只，观察比较两组糖尿病大鼠心肌组织中iNOS、NO、HO-1、CO的变化情况。 结果 实验结束时测定大鼠心肌组织中HO-1活性和iNOS活性，山楂叶总黄酮治疗组心肌组织中HO-1活性、iNOS活性均低于糖尿病组（P 0.01），实验结束时测定大鼠血清中CO和NO含量，山楂叶总黄酮治疗组血清中CO、NO含量均分别明显低于糖尿病组（P 0.05）。结论 山楂叶总黄酮通过清除糖尿病大鼠心肌中自由基等抗氧化机制起到保护糖尿病大鼠心肌的作用。 　　[关键词] 糖尿病性心肌病；山楂叶；总黄酮；HO-1/CO系统；iNOS/NO系统 　　[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）16-0008-02 　　糖尿病性心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）的发病机制尚未完全阐明，众多学者提出“氧化应激学说”，该学说认为糖尿病并发症的出现可能是由氧化应激导致线粒体的电子传递链过氧化物产生过量所引起[1]。血红素氧合酶（heme oxygenase，HO）是机体参与亚铁血红素代谢的一种多功能的微粒体氧化酶，可被降解生成胆绿素、一氧化碳（CO）和亚铁离子，在氧化应激过程中具有重要的细胞保护作用。HO分为诱生型（HO-1）、结构型（HO-2）和最近才发现的血红素氧合酶-3三种类型。HO-1也叫做热休克蛋白，是目前发现的最易受诱导的抗氧化应激的酶。HO-1具有抗氧化、抗炎、抗血小板凝集、细胞保护和调节血管张力等许多重要生物学作用[2]。一氧化氮（NO）是一氧化氮合酶（NOS）催化L-精氨酸（L-Arg）生成的产物，NOS 分为 3 种类型：Ⅰ型 NOS（nNOS）、Ⅱ型NOS（eNOS）、Ⅲ型NOS（iNOS）。nNOS 和 eNOS 合称结构型，iNOS为诱导型。研究报道，NOS/NO系统不仅可以激活HO/CO系统，还对其有抑制作用，而HO/CO系统对NOS/NO系统也有反馈抑制作用[3]。山楂叶是蔷薇科山楂属植物的叶子，其主要化学成分是总黄酮。山楂叶总黄酮具有抗动脉粥样硬化、抗氧化、降血糖及抗血小板凝聚的作用，尤其具有提高组织中抗氧化酶活性、抑制自由基损伤、防止脂质过氧化的抗氧化作用[4]。本研究旨在探讨山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠心肌中HO-1/CO系统和iNOS/NO系统的影响，从而为进一步深层次的研究DCM的发病机制指明了新的方向。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　清洁级雄性SD大鼠40只，体重（180±20） g（由佳木斯大学实验动物中心提供）。STZ由美国Sigma公司生产。将SD大鼠随机分成两组，即Ⅰ组（山楂叶总黄酮治疗组）和Ⅱ组（糖尿病组），每组20只。 　　1.2 实验方法 　　在大鼠适应期后给予高糖高脂饲料（在标准全价混合饲料的基础上添加蔗糖、炼猪油和蛋黄，热能含量21.6 kJ/kg）。喂养4周后腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（临用前溶解在pH=4.0的0.1 mmol/L柠檬酸缓冲液内，25 mg/kg，每日1次，连续2 d）。注射药物2 d后间隔1 d应用血糖测试仪测查大鼠空腹血糖（测试前禁食12 h），以血糖含量16.7 mmol/L为2型糖尿病大鼠模型判定标准。Ⅰ组予注射用山楂叶总黄酮（益心酮注射液，由长春三九生物制药提供），每天腹腔注射山楂叶总黄酮注射液（30 mg/kg）1次，连续给药4周；Ⅱ组则给予腹腔注射生理盐水，同样连续4周。 　　1.3 检测方法 　　1.3.1 HO-1的测定 参照Morita等[5]的方法并稍作改良。在紫外分光光度计上测定胆红素的生成量即可反映HO的活性。 　　1.3.2 CO的测定 应用721A型分光光度计测OD541和 OD555，根据文献报道的CO含量的计算公式计算。 　　1.3.3 NOS活性测定 采用3H精氨酸转化生成3H胍氨酸测定法。 　　1.3.4 血清NO微量测定 参照文献[6，7]进行，用酶标仪在570 nm处读取光密度，同时以亚硝酸盐作标准曲线，结果以NO转变为亚硝酸盐表示。 　　1.4 观察指标 　　观察比较两组糖尿病大鼠心肌组织中HO-1、CO、iNOS、NO的变化情况。 　　1.5 统计学方法 　　结果以均数±标准差（x±s）表示，组间差异采用t检验，使用的统计学软件为SPSS 18.0软件，P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1大鼠心肌组织细胞中HO-1和iN