应用限制性显示技术制备hcv+cdna诊断基因芯片的初步研究探究.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 应用限制性显示技术制备!# $%’ 诊断基因芯片的初步研究 ， 1 # # 1 1 1 孙朝晖 郑文岭 彭翼飞 张 宝 马文丽 1 （南方医科大学基因工程研究所 广州 1$1 ） # 广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所 广州 ） （ 1$$1$ 摘 要：制备丙型肝炎病毒（ ）检测芯片并进行验证、初步检测质量评价。采用限制性显示（ ， HI% J5KL+,CL, M,K*’8N ）技术制备芯片探针，从载体 中切出 全长 ， 酶消化，所得的限制性片段进行 JE *I%2O!P6Q HI% CE-) !#.) ! JE2RIJ 扩增，经聚丙烯酰胺电泳（ ）结合银染法进行分离。切胶回收后作 次 ，得到较纯净的 限制性 R)S; . RIJ HI% CE-) 片段。扩增后的产物克隆至*TE1024 载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备 成检测芯片进行杂交验证分析，对芯片检测进行优化、初步的质量评估。运用 技术，得到 个 、大 JE #! #$$ U 0$$V* 小均一的基因片段，序列分析表明，均属于HI% 特异基因，可以作为诊断芯片探针；杂交、测序结果显示，芯片检测 的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳。利用JE 技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方 法；制备的诊断芯片可以用于检测HI% J-)，具有敏感、检测结果较为可靠的优点。 关键词：丙型肝炎病毒，限制性显示，分子探针，基因芯片，杂交，诊断 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） J./! ) $$$126#$/ #$$ $#2$##62$ 是一种高度变异球形外壳的正链 病 及 ： HI% J-) *S)4II)I)II)SII)))III) Q\J ‘2SS444S 毒，属黄热病毒属，由此引起的丙型肝炎严重危害人 SI4SS4S4S）采用a’,?6 Y$ 软件设计，通过S,VC 公 们的健康，临