南医大微免实验六.pptVIP

微生物与免疫学实验（六） 肥达试验 原理：用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 操作：肥达试验（试管凝集反应） 器材：试管6支/人，试管架1个/4人 吸管1支/人，标签1个/人 已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检：病人血清（1:10稀释） 肠道杆菌（G—） SS培养基 双糖铁培养基 生化反应表 实验报告 示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌 破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌 肥达试验：原理、步骤、结果、分析 * * 主要内容 一、操作：肥达试验 二、示教：肠道杆菌 霍乱弧菌 炭疽杆菌 厌氧性细菌 0.5 ml生理盐水 1 2 3 4 5 6 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5ml血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5 h，观察结果 肠道杆菌的鉴定 标本增菌培养 接种SS平板 双糖铁培养基初步鉴定 其他生化反应鉴定 血清学鉴定 有菌 可疑的乳白色菌落 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 上层 （固体） 下层 （半固体） 乳糖 硫酸亚铁 酚红 葡萄糖 - - - - - 变形 - - -/+ - 伤寒 - - - - - - 痢疾 - - - 大肠 靛 尿素 H2S 蔗 甘 麦 乳 葡 炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央 30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状 炭疽杆菌培养物 霍乱弧菌：G-，一个弯曲 厌氧芽胞梭菌 破伤风梭菌 肉毒梭菌 产气荚膜梭菌 破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验 产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基 高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验 肉毒梭菌：庖肉培养基 第6管 均匀混浊 ＋ 少量凝集 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块 以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O达到1:80，H达到1:160 H甲或H乙达到1:80或以上有诊断意义 结果判断 血清稀释度 菌液 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 效价 伤寒H 伤寒O 甲副H 乙副H 记录结果 *吸管放桶，试管放锅 *