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花楸果实醇提物抑菌稳定性的实验研究 　　摘要：本实验主要以金黄色葡萄球菌为指示菌，研究花楸果实醇提物活性成分的稳定性，结果表明花楸果实醇提物分别经温度、酸碱度、紫外处理后只有在酸性条件下具有一定的抑菌活性，碱处理使其抑菌活性消失；温度、紫外照射对其稳定性几乎没有影响。 　　关键词：花楸；抑菌；稳定性 　　中图分类号：S574 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-08-22-2 　　花楸又名臭山槐，为蔷薇科、花楸属乔本植物。小枝粗壮，树皮灰色，奇数羽状复叶，每叶5～8对，叶披针形，复伞房花序，花白色，果实近球形，径0.6～0.8厘米，分桔红色和红色两种。喜生湿润肥沃的酸性或微酸性土壤，散生于溪谷和天然林中，喜光、耐寒、耐阴。花楸一般分布在我国的东北、华北、内蒙古等地区。由于花楸树形美观，春季白花簇簇，多而稠密，秋叶变红艳，红果满树披挂，光彩夺目，经久不落，因此可作为城市、园林绿化的观赏苗木和绿化苗木树种进行培育，花楸果实具有一定的食用和药用价值，并且花楸果实的抑菌效果十分明显。本文对花楸果实的醇提物金黄色葡萄球菌的抑制作用进行研究。 　　由于传统的防腐剂一般都是化学制品，对人体有一定的伤害。目前，国际上的食品、药品防腐剂正在向天然、无毒的趋势发展。因此，筛选抑菌的天然物质已经越来越热门起来。根据有关报道，花楸果实具有极高的杀菌能力，特别对于金黄色葡萄球菌更加显著，因此利用花楸果实的醇提物制备的防腐剂应用在食品、药品或者各个领域中是可行的。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　试验材料采集于牡丹江师范学院，采样时间为 2012年 7～9月，经鉴定为花楸，植物标本保存于牡丹江师范学院生命科学与技术学院微生物实验室。材料用无菌水洗净阴干、粉碎过40目筛，密闭封存备用。 　　1.2 供试菌种 　　供试菌种，金黄色葡萄球菌（牡丹江师范学院生命科学学院微生物实验室提供）。菌种用牛肉膏蛋白胨培养基培养。 　　1.3 试验仪器 　　RXZ-500C型多段人工气候培养箱、SW-CJ-2FD进化工作台、电子万用炉、ES-215型高压蒸汽灭菌锅。 　　1.4 95%乙醇提取物的制备 　　称取 100克花楸果实粉末，加入 500毫升，95%的乙醇，冷浸24小时，55℃～65℃回流提取2次，每次1小时，合并溶剂，回收溶剂，制得浸膏，备用。 　　1.5 提取物的抑菌活性测定 　　1.5.1 菌种的活化及菌悬液的制备 从斜面培养基挑取金黄色葡萄球菌菌种，先于35℃～37℃活化 18小时，用玻璃珠打散加至装有 10 毫升的无菌水的试管内，振荡均匀，无菌生理盐水作为对照，调节菌悬液的浓度约为 1×104个。采用无菌移液枪吸取 100微升，上述菌悬液加入到营养琼脂培养基上，并用无菌涂布棒涂布均匀。 　　1.5.2 不同的温度对抑菌稳定性的影响 将 2克/毫升的花楸果实提取液分别置于40℃、60℃、80℃、100℃的恒温水浴锅中处理 20分钟后备用，另取部分花楸果实提取液于121℃高压蒸汽灭菌20 分钟后备用。用无菌镊子放置4个已灭菌的牛津杯。其中 3 个各加入100微升同一浓度的花楸果实醇提物，另外一个加入100微升无菌生理盐水作为阴性对照。上述操作完成后，将平板于超净工作台中静置20分钟后，置于37℃恒温培养箱内培养24小时，利用十字交叉方法测量抑菌圈直径，结果求平均值，比较抑菌效果。 　　1.5.3 不同pH对抑菌稳定性的影响 分别用2摩尔/升的 HCl和2摩尔/升NaOH 将花楸果实提取液的pH 调整为 3、5、7、9、11，并放于4℃条件下备用。利用无菌镊子将4个已灭菌的牛津杯放置培养基上。其中3 个各加入100微升相同 pH的花楸果实提取液，作为3 个平行。另外一个作为对照加入100微升未处理花楸果实原提取液。上述操作完成后，将平板于超净工作台中静置20分后，于37℃恒温培养箱中培养 24小时，利用十字交叉法测量抑菌圈直径。 　　1.5.4 不同紫外照射对抑菌稳定性的影响 将2克/毫升花楸果实提取液在15瓦、50厘米的紫外灯下分别照射10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟。并放于红灯条件下备用。利用无菌镊子将4 个已灭菌的牛津杯放置培养基上。其中3 个各加入100微升相同紫外照射时间的花楸果实提取液，作为3 个平行。另外一个作为对照加入100微升无菌生理盐水。上述操作完成后，将平板于超净工作台黑暗放置20分钟后，于37℃恒温培养箱中培养24小时，仍然利用十字交叉法测量抑菌圈直径。 　　2 结果与分析 　　参照NCCLS/CLIS2006标准和中国卫生部消毒规范判断不同诱变剂对花楸果实95%醇提取物的抑菌活性进行测定比较，结果发现经温度、pH、紫外等不同诱变剂的