重编程的crispr-cas9对hpv611 e7基因转化细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究-effect of reprogrammed crisp - ca s9 on proliferation and apoptosis of hpv 611 e7 gene transformed cells and its mechanism.docx

安徽医 安徽医科大学博士学位论文 万方数据 万方数据 学位论文独创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保留 学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权允许 论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索， 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士 学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国学位论文 全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版， 并同意编入 CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》 中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位论文作者签名： 导师签名： 日期： 日期： 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 英文缩略词表 1 HYPERLINK \l _bookmark1 中文摘要 3 HYPERLINK \l _bookmark2 英文摘要 6 HYPERLINK \l _bookmark3 正文 9 HYPERLINK \l _bookmark4 1. 引言 9 HYPERLINK \l _bookmark5 1.1 研究背景 9 HYPERLINK \l _bookmark6 1.2 本课题的研究思路 16 HYPERLINK \l _bookmark7 2. 实验材料和方法 19 HYPERLINK \l _bookmark8 2.1 实验对象 19 HYPERLINK \l _bookmark9 2.2 研究所用试剂 20 HYPERLINK \l _bookmark10 2.3 研究所用仪器与耗材 21 HYPERLINK \l _bookmark11 2.4 研究使用生物网站和分析软件 23 HYPERLINK \l _bookmark12 2.5 实验方法 23 HYPERLINK \l _bookmark13 3. 结果 38 HYPERLINK \l _bookmark14 3.1 HPV6 E7 基因合成与表达载体构建 38 HYPERLINK \l _bookmark15 3.2 HPV11 E7 基因合成与表达载体构建 40 3.3 CRISPR-Cas9 表达载体构建 42 3.4 HPV 6/11 E7 基因表达对人包皮角质形成细胞生长的影响58 3.5 重编程的 CRISPR-Cas9 系统对 HPV6 E7 和 HPV11 E7 蛋白表 达的影响 59 3.6 重编程的 CRISPR-Cas9 系统对角质形成细胞异常增殖的影 响 61 3.7 重编程的 CRISPR-Cas9 系统对角质形成细胞凋亡的影响 . 62 HYPERLINK \l _bookmark16 4. 讨论 65 HYPERLINK \l _bookmark17 4.1 概论 65 HYPERLINK \l _bookmark18 4.2 HPVE7 基因的致病作用讨论 69 4.3 CRISPR-Cas9 对 HPV E7 基因的失活作用和机制讨论 . 70 4.4 针对 HPV 相关基因的 CRISPR-Cas9 系统的改进计划和研 究前景展望 73 HYPERLINK \l _bookmark19 5. 结论 75 HYPERLINK \l _bookmark20 6. 参考文献 755 HYPERLINK \l _bookmark22 附 录 81 读博期间发表论文……………………………………………………82 HYPERLINK \l _bookmark23 致 谢 84 HYPERLINK \l _bookmark24 课题综述 85 CRISPR-Cas9 技术在治疗人类疾病中的应用 85 HYPERLINK \l _bookmark25 参考文献 92 安徽医 安徽医科大学博士学位论文 英文缩略词表 英文缩写 英文全名 中文全名 HPV Human Papillomavirus 人乳头状瘤病毒 CRISPR Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat sequences 成簇的、规律间隔的短回文 重复序列 CAS CRISPR-Associat