第八章核酶和抗体酶（课件）.pptVIP

(1) 自身催化剪切型RNA 剪切机制 类型 锤头型 发夹结构 HDV RNA 三、 核酶的应用现状 三、 核酶的应用现状 三、 核酶的应用现状 三、 核酶的应用现状 发夹（hairpin ）结构 发夹核酶发现于三种不同植物RNA病毒，即烟草环点病毒，菊苣黄色斑点病毒型和筷子芥花叶病毒。三种发夹核酶分别是这些RNA病毒卫星RNA的负链，英文缩写分别是sTRSV, sCYMVT, sARMV, 均为单链RNA 发夹核酶催化机制 金属离子在催化反应中起结构作用，其剪切活性比锤头结构核酶高 二、 抗体酶的催化反应 2、重排反应 二、 抗体酶的催化反应 3、氧化还原反应 二、 抗体酶的催化反应 4、金属螯和合反应 二、 抗体酶的催化反应 5、磷酸酯水解反应 二、 抗体酶的催化反应 6、磷酸酯闭环反应 二、 抗体酶的催化反应 7、光诱导反应 a. 光聚合反应（二聚作用） 二、 抗体酶的催化反应 7、光诱导反应 b. 光裂解反应 三、 抗体酶的制备方法 1、拷贝法 2、引入法 1、 拷贝法 用酶作为抗原免疫动物得到抗酶的抗体，再将此抗体免疫动物并进行单克隆化，获得单克隆的抗抗体。对抗抗体进行筛选，获得具有原来酶活性的抗体酶 缺点：具有一定的盲目性和偶然性，并且不能产生新酶 2、 引入法 将催化基团或辅助因子引入到抗体的抗原结合部位，可采用选择性化学修饰方法，亦可利用蛋白质工程和基因工程技术 四、 抗体酶研究展望 研究酶作用机理，获得蛋白质结构与功能间关系的一般规律 获得一类新型的蛋白酶 催化天然酶不能催化的反应 第三节结束 抗体酶概述 抗体酶的催化反应 抗体酶的制备方法 抗体酶研究展望 酰基转移反应 重排反应 氧化还原反应 金属螯和合反应 磷酸酯水解反应 磷酸酯闭环反应 光诱导反应 拷贝法 引入法 第三节结束 点击返回 Ⅰ型内含子的剪接机制 p G-OH p 3’ p P-G OH p P-G 3’ HO Mg 2+或Mn 2+ GMP,GDP,GTP 外显子 内含子或居间序列（Intervening sequence,IVS) 5’ IVS L-19IVS UCUAAA GUAA Pre-rRNA UCU A A A GUAA UCUoH3’ 5’GAAA GUAA UCUUAA 5’GAAA GOH 3’ G-IVS 19nt 5’ 3’ rRNA 5’ 3’ 5’ pGOH 3’ 5’ 3’ 四膜虫rRNA前体自我剪接反应 Ⅰ型内含子二级结构通式 保守序列 G结合位点 剪接部位 引导序列 Ⅱ型内含子的剪接机制 p 2’ HO-A p p-A p 3’ OH p P-A HO 3’ Mg 2+ 套环的形成 5’ 3’ 外显子连接 Ⅱ类内含子有一个保守的二级结构： 结构域Ⅰ：两个保守内含子结构序列EBS1,EBS2与两个外显子结构序列IBS1,IBS2互相配对 结构域Ⅴ：高度保守，催化活性必需 结构域Ⅵ：A 提供2’-OH Ⅱ型内含子二级结构通式 5 ’ 3’ 这类RNA进行自身催化的反应是只切不接。 特点：在 Mg 2+ 或其他二价金属离子存在下，在特定的位点，自我剪切，产生5’-OH 和2’，3’-环磷酸二酯末端。 剪 切 机 制 核酶自身剪切反应 锤头型核酶的二级结构 和空间立体结构示意图 三个双螺旋区 13个核苷酸残基保守序列 剪切反应在右上方GUX序列的3’端自动发生 催化过程需要二价金属离子参与 17位（ X ）的核苷酸残基多数是C,不能是U,G. 7位核苷酸残基的置换不会对酶活性产生很大影响 锤头二级结构编号 7位核苷酸 17位核苷酸 锤头结构的 五种类型 R示酶，S示底物，箭头示剪切位点 * 退出 Enzyme Engineering酶工程 第八章 核酶和抗体酶 第一节 核酶 第二节 脱氧核酶 第三节 抗体酶 第一节 核酶 一、 核酶的发现 二、 核酶的种类 三、 核酶的应用现状 1982年美国T. Cech等人发现四膜虫的rRNA前体能在完全没有蛋白质的情况下进行自我加工，发现RNA有催化活性 Thomas Cech University of Colorado at Boulder, USA 一、核酶的发现 1983年美国S.Altman等研究RNaseP（