虫草素对胃癌细胞凋亡的机制分析-mechanism of cordycepin on apoptosis of gastric cancer cells.docxVIP

苏州 苏州大学硕士学位论文 - - PAGE 16 - 主要缩略词表 Abbreviation MTT 四甲基偶氮唑蓝 PI propidium iodide 碘化丙啶 APAF-1 凋亡蛋白酶活化因子-1 GC Gastric Cancer 胃癌 Cyto C Cytochrome C 细胞色素 C 虫草素对胃癌细胞凋亡的机制研究 摘要 目的 胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，即使实施根治性手术，五年生存率仍不 理想。术后的高复发转移率是影响生存时间的主要原因。化疗在胃癌治疗中发挥 着举足轻重的作用，但由于肿瘤细胞对传统化疗药物的耐药性，使得传统化疗药 物治疗胃癌的效果不理想。目前，中医药用于恶性肿瘤的治疗受到越来越多的关 注。虫草素是虫草中核苷类主要活性成分，同时也是虫草的主要活性成分，其具 有多种生物活性，如抗肿瘤、抑菌、抑制病毒等作用。研究证明虫草素能抑制 mRNA合成，诱导细胞凋亡，使细胞分化，从而对多种肿瘤细胞的生长有抑制作 用。本课题以胃癌细胞株BGC823及MGC-803为研究对象，探讨虫草素对人胃癌 细胞体外生长及抑制及诱导凋亡的作用及其机制，为虫草素临床治疗胃癌提供实 验依据。 方法 不同浓度虫草素作用于胃癌细胞不同时间后，用MTT法检测虫草素对于胃 癌细胞的生长抑制作用；运用细胞克隆形成实验，观察不同浓度虫草素影响胃癌 细胞的克隆形成能力；运用流式细胞术检测细胞周期细胞，Western blot法检测细 胞周期相关蛋白的表达；用AnnexinV-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡 率，再运用荧光显微镜下观察细胞的形态学变化；Western blot方法检测凋亡相关 蛋白的表达。 结果 虫草素对于胃癌细胞有明显的生长抑制作用，呈明显的时间和浓度效应关 系（P0.05）。虫草素呈剂量依赖性的诱导胃癌细胞株阻滞于S期；Western blot 法检测细胞周期相关蛋白的表达提示cyclin A 和 cyclin B1的表达下调，cyclin D1 的表达上调，提示虫草素通过诱导这些细胞阻滞于S期。流式细胞仪检测细胞早 期凋亡率及晚期凋亡率与对照组相比较具有有统计学差异(P0.05)，且随着药物 浓度的提高,诱导细胞凋亡的作用越明显。运用荧光显微镜下观察虫草素处理的 胃癌细胞显示细胞体积变小，染色质浓缩并聚集于核膜下呈境界分明的颗粒状块 或月牙形。Western blot方法检测凋亡相关蛋白发现Bcl-2, NF-κB蛋白表达减少， 而Caspase-3、Caspase-9、PARP-1、Bax、细胞色素C的表达明显增加。 结论 虫草素能诱导人胃癌细胞的凋亡，其机制可能是通过线粒体途径引起细胞 阻滞于S期从而诱导凋亡的发生。 关键词：胃癌细胞，虫草素，细胞凋亡，细胞周期 Abstract Aim Gastric cancer is one of the most common malignant tumor in digestive system. Even if the radical operation is implemented, five years survival rate will be still not ideal. The high recurrence is a main factor influencing the survival time. Chemotherapy plays a decisive role in the treatment of gastric cancer. Because of the drug resistance of tumor cells to traditional chemotherapy drugs, the effect of conventional chemotherapy treatment for gastric cancer is not good. At present, more and more Chinese medicine for the treatment of malignant tumors has been focused on. Cordycepin is the main active ingredient of Cordyceps nucleoside and also Chinese caterpillar fungus, which has many biological activities, such as antitumor, antibacterial, inhibiting virus action. The research has been proved that cordycepin