蛹虫草中核苷化合物的化学研究探究 跟药理学研.doc

PAGE PAGE 3 虫草属真菌中核苷类化合物的 化学研究及药理学研究概况 杨淑芳1 靳向东1 王丽香2 王晶3 (1吉林省蚕业科学研究所 2永吉县牧业管理局 3永吉县科学技术馆) 虫草属(Cordyceps)真菌为子囊菌纲麦角菌科的一类药用真菌。此属真菌种类有350余种。在我国作为药用的有冬虫夏草(C.sinensis)、蛹虫草(C.militaris)、亚香棒虫草(C.hawksii)及蝉花菌(C.sobolifera)等。此外，四川凉山虫草（C.liangshanensis Zang Lin et Hu）、山西香棒虫草(C.barnesii)、古尼虫草(C.gunnii)等也有少量分布。 1 虫草属真菌中核苷类化合物的化学研究概况 1.1 虫草属真菌中核苷类化学成分 关于虫草属真菌中核苷类化学成分的研究报道较多，主要集中在冬虫夏草、蛹虫草及其发酵菌丝体。其中核苷类化合物包括虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷、腺嘌呤、尿嘌呤、次黄嘌呤、次黄嘌呤核苷等，它们的化学结构如下: 图1虫草属真菌中核苷类化合物的结构 Cunningham和Frederiksen等于50年代首次报道了从蛹虫草的培养液中分离出核苷类抗菌素——虫草素并发现其显著的抗癌活性，引起了人们对虫草属真菌中核苷类化合物的广泛重视，新的核苷类物质不断被发现。徐文豪等利用强酸性离子交换树脂、大孔吸附树脂和硅胶柱层析从西藏产冬虫夏草的子座中分离得次黄嘌呤核苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶和杂有鸟嘌呤的次黄嘌呤;从虫体中得到微量次黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和腺苷。刘静明等利用Dowex- I〔氯型〕树脂柱从蛹虫草菌丝中分离得到腺嘌呤、腺苷及虫草素。刘柯等利用硅胶柱色谱、制备液相、制备薄层等方法从人工培养的蛹虫草子实体的乙醇提取物中分离得到虫草素、腺苷、N一甲基腺苷、05一乙酰基虫草素、N- [β一(乙酰胺甲酰)氧乙基〕腺苷等5个核苷类化合物。 1.2 虫草属真菌中核苷类化合物的含量测定 目前，对虫草属真菌中核苷类化合物的含量测定主要采用高效液相法(HPLC)法和薄层色谱法。 2000年版中国药典采用HPLC法测定冬虫夏草中腺苷的含量。目前采用HPLC法对蛹虫草中核苷类化合物含量进行测定的报道主要有：蒋宁等采用正交实验对虫草素和腺苷的提取方法作了考查；周洪英等对蛹虫草九个菌株虫草素含量进行了测定；陈安徽等对古尼拟青霉小孢变种核苷类成分进行了分析。 自20世纪60年代薄层色谱扫描法(TLCS)问世以来,其发展更为迅速,在化学及药学等领域都得到了广泛应用。TLCS已成为定性定量分析的有效手段。如刘静明等将蛹虫草菌丝和冬虫夏草样品各2.0g(40目)置50mL圆底烧瓶中,加20%乙醇溶液40mL回流提取5h,趁热抽滤,20%乙醇洗3次,合并滤液,浓缩至2mL,拌以硅胶H1.5g,室温干燥,干法装柱,90%乙醇洗至80mL,减压浓缩,然后用50%乙醇定容至2.0mL作为样品溶液。用日本岛津CS-910双波长薄层扫描仪,以氯仿∶乙酸己酯∶异丙醇∶水=8∶2∶6∶0.5为展开剂,经反射法锯齿扫描得到蛹虫草菌丝和冬虫夏草虫草菌素的含量分别为0.007%~0.022%和0.007%。 近来，高效毛细管电泳法也被用于冬虫夏草的质量控制。李绍平等用此方法测定了天然和人工冬虫夏草中腺苷、尿苷和鸟苷的含量，并考察其变化。吕鹏等探讨了不同提取方法对蛹虫草提取液质量的影响。研究表明，超声波处理有利于提高提取液中多种物质的含量，考虑到操作的简便性，在实际应用中（尤其是样品量较大时）可以考虑采用超微粉碎的方法制备蛹虫草提取液。 汪宇等比较了天然蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的含量。在HV-301高效毛细管电泳仪上进行定量分析,采用石英毛细管柱，以pH9.0的40mmol·L-1硼砂溶液作为电极缓冲液；分离电压为16KV；检测波长为254nm。结果，天然蛹虫草中核苷类化合物主要集中在子座部分。人工培养蛹虫草子座和菌丝中虫草素的含量分别是天然蛹虫草子座中的5.04倍和10.85倍;液体培养蛹虫草菌丝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鸟苷含量均高于固体培养蛹虫草子座。结论：天然蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的种类和含量具有较大的差异，高效毛细管电泳法可以用于蛹虫草的定量分析，具有分离度高、简便、准确,样品消耗少等特点。 对比研究显示：人工培养的虫草菌丝及子座中核苷类化合物的含量多数接近、有的甚至超过了天然虫草。尤其是人工培养的蛹虫草菌丝及子座中虫草素的含量明显高于天然虫草,这就为把人工培养虫草作为天然虫草的代用品提供了理论依据. 2 虫草属真菌中核苷类化合物的药理学研究概况 2.1 虫草素的药理作用