有氧运动和白藜芦醇对肥胖大鼠脂联素受体及下游信号通路影响.docVIP

有氧运动和白藜芦醇对肥胖大鼠脂联素受体及下游信号通路影响 　　摘要：为了探讨有氧运动和白藜芦醇对肥胖大鼠脂联素受体及下游信号通路的影响及机制，将40只大鼠分成5组，分别为普通对照组（C）、肥胖模型对照组（D）、肥胖运动组（E）、白藜芦醇对照组（F）、白藜芦醇运动组（G）；造模完成后，E和G组采用6周跑台训练，F和G组按照大鼠称重后40 mg/kg的白藜芦醇（Res）剂量进行6周灌胃。用ELISA法测得血清脂联素；RT-PCR方法测得AdipoR1、AdipoR2及PPARγ、AMPKα蛋白表达。结果发现：（1）血清脂联素水平模型组低于普通对照组，而模型组中白藜芦醇运动组最高；（2）脂联素受体1和2的蛋白表达，白藜芦醇运动组均高于其它各模型组；（3）普通对照组PPARγmRNA表达最高，而AMPKαmRNA表达白藜芦醇运动组最高；以上结果说明，本实验中通过运动和白藜芦醇联合干预，提高血清脂联素及受体的水平，从而降低TG、GLU等相关指标，脂联素受体激活下游信号通路蛋白AMPKαmRNA和PPARγmRNA，并使其表达增加，从而在一定程度上改善大鼠内脏脂肪细胞的紊乱，减少脂肪合成，增加血清TG清除，减少脂肪组织脂肪积聚，对改善大鼠肥胖起到了一定的作用。 　　关键词：运动生物化学；脂朕素受体；有氧运动；白藜芦醇；血清脂联素；大鼠 　　中图分类号：G804.7 文献标识码：A 文章编号：1006-7116（2012）06-0139-06 　　肥胖症与高血压、高血脂、高血糖等心脑血管疾病密切相关，研究肥胖的发生及控制的理论与方法是目前亟待解决的问题。发生肥胖的原因众多，其中，高脂饮食和不正确的生活方式，是引起肥胖发生最主要的因素[1]。 　　脂联素作为近年来发现的一种由脂肪细胞分泌的特异性蛋白，可通过与靶细胞膜上的脂联素受体结合，激活下游信号通路，促进脂肪酸氧化和葡萄糖摄取，参与葡萄糖、脂肪代谢调节。近年来研究显示，运动和白藜芦醇单独干预均可提高脂联素及受体水平[2-3]，但通过双重干预的作用，对脂联素受体下游信号通路的研究尚未见到报道。本研究试图通过二者联合干预的共同作用，观察脂联素及受体下游信号通路蛋白表达的变化，探讨有氧运动和白藜芦醇联合干预的叠加作用，为更有效改善肥胖症提供实验依据。 　　1 实验材料与方法 　　1.1 实验动物与动物分组 　　雄性SD大鼠40只（（190±5.0） g，购自广州中医药大学），适应性喂养1周后（环境温度20～25℃），随机分为5组每组8只：普通对照组（C）、肥胖模型对照组（D）、肥胖运动组（E）、白藜芦醇对照组（F）、白藜芦醇运动组（G）。普通对照组采用普通饲料喂养，其它各模型组均为高脂饲料喂养，自由饮食饮水。高脂饲料比例（质量比）：碳水化合物（60%）、蛋白质（20%）、脂肪（5%）。高脂喂养26周。分组时组间体重无显著性差异。 　　1.2 动物运动及灌胃方式 　　训练模型：Bedford等根据大鼠体重/摄氧量回归方程所建立的递增运动负荷训练大鼠模型[4]。正式训练前，大鼠进行适应性训练1周。正式训练开始，速度为运动强度65% VO2max，20～25 m/min；每天训练1 h，09：00～10：00训练，每周训练5 d。共6周。 　　给药时间和剂量：模型建立成功后，F组和G组每天08：00给药，每周7 d。大鼠称重后按照40 mg/kg剂量的白藜芦醇（Res）溶于1 mL的双蒸水中，形成混溶液后进行灌胃[5]。 　　1.3 动物组织取材 　　训练、灌药结束后取材，各组大鼠采用水合氯醛麻醉，取腹部正中线切口，迅速腹主动脉取血6～8 mL，采血后，快速取出腹部脂肪组织称量并记录，做好标记，立即将脂肪标本置于液氮中，然后放于-80 ℃的冰箱中保存。 　　1.4 血液指标的测定 　　将3 mL血置于EDTA抗凝管中，以4 000 r/min离心5 min分离血清，取2 mL置于EDTA抗凝管中。血脂、血糖、HDL（好胆固醇）、LDL（坏胆固醇）检测均采用暨南大学华侨医院全自动生化分析仪（HITACH公司7020全自动生化分析仪）进行测定。 　　血清脂联素的测定采用酶联免疫吸附法，具体步骤按试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司）说明进行。其原理为双抗体夹心法，即用初抗包被，标准品或待测样品中的脂联素与其特异性结合，再加入标记的兔抗鼠脂联素抗体，它可与SA-HRP特异性结合。SA-HRP可催化底物显色，加入中止液，用酶标仪读取每孔的光密度值，样品中脂联素的浓度与其光密度值成正比关系。 　　1.5 RT-PCR法测定大鼠脂肪组织基因表达 　　用RT-PCR方法测定脂肪组织中AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PPARγ的mRNA基因表达。（引物序列见表1）。 　　用Trizol试剂，采用一步法提取