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暗紫贝母鳞茎组织培养 　　摘要：由于不合理的采挖，暗紫贝母野生资源奇缺，而植物组织培养技术不仅可以有效地保存暗紫贝母种质资源，而且可以解决人工种植的种苗问题。以暗紫贝母鳞茎为外植体，通过选择流水冲洗时间和消毒时间，研究不同激素组合对不定芽的诱导效果以及诱发产生不定芽或不定根从而长成完整的植株的过程，以期建立暗紫贝母的快速无性繁殖体系。结果表明，以暗紫贝母鳞茎为外植体，先用流水冲洗3 h，经75%乙醇表面消毒后，用0.10%氯化汞处理8 min，最后用无菌水清洗5次的效果最佳，污染率仅为7.5%；不定芽诱导的最佳培养基配方是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA，诱导率达66.7%；最佳继代培养基配方同不定芽诱导，增殖系数可达8.27；在1/2MS+0.5 mg/L NAA的培养基上的生根情况较好。 　　关键词：暗紫贝母；组织培养；培养基配方；鳞茎；不定芽；诱导；增殖；生根 　　中图分类号： Q945.51 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）03-0017-03 　　暗紫贝母（Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia）为著名中药材川贝的主要来源之一，入药部位为地下鳞茎，具有清热润肺、化痰止咳的功效[1]。暗紫贝母喜寒凉气候，主要分布于四川省阿坝地区的海拔较高的高原与草地，生长环境特殊，人工引种栽培有很多困难。另外，暗紫贝母生长周期长，一般4～5年才可采收，而且产量很低，因此目前暗紫贝母的资源比较短缺，很大程度上都依赖于野生资源。经过多年采挖，暗紫贝母的野生资源破坏严重，产量逐年减少，货源紧缺，价格逐年攀升，因此寻找新的途径以解决其资源问题是非常迫切的。植物组织培养技术可以从根本上解决暗紫贝母的苗种问题，成本低，见效快；此外，可以研究组培出来的暗紫贝母愈伤组织的药效，有可能成为有效的替代技术。因此，暗紫贝母组培技术的研究在药用植物开发研究和生产中具有特殊的意义和应用潜力[2]，本研究探讨不同植物激素组合对暗紫贝母鳞茎不定芽诱导、增殖、生根情况的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　暗紫贝母地下鳞茎于2012年6月采自四川省康定地区。 　　以MS为基本培养基，附加30 g/L蔗糖、7 g/L琼脂，调节pH值为5.8，添加不同浓度2，4-D、NAA、6-BA等激素。所有培养基均在121 ℃条件下高压灭菌15 min。 　　培养条件为温度（25±1） ℃、空气相对湿度50%～60%、光照时间12 h/d、光照度1 000～1 500 lx。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 外植体的消毒 选取白嫩、健康的新鲜贝母地下鳞茎，用自来水冲洗1～2 h，置于超净工作台上用75%乙醇进行表面消毒，采用5种方式对鳞茎外植体进行消毒处理，分别为：处理1：流水冲洗1 h+70%乙醇处理30 s+0.05%氯化汞浸泡、振荡 8 min；处理2：流水冲洗1 h+70%乙醇处理30 s+0.10%氯化汞浸泡、振荡 8 min；处理3：流水冲洗1 h+70%乙醇处理30 s+10%次氯酸钠浸泡、振荡 20 min；处理4：流水冲洗3 h+70%乙醇处理30 s+0.10%氯化汞浸泡、振荡 8 min；处理5：流水冲洗3 h+70%乙醇处理30 s+0.10%氯化汞浸泡、振荡 10 min。消毒后用无菌水清洗5次后接种于附加不同激素组合的MS培养基中进行培养，接种2周后统计污染率，以期筛选出适合的灭菌方式。 　　1.2.2 不同激素组合对暗紫贝母鳞茎诱导的比较 选用当年生鳞茎作为外植体，将其切成0.5 cm大小、厚度0.2 cm左右，置于含NAA（0.5、2.0 mg/L）、6-BA（0.5、2.0 mg/L）、2，4-D（2.0 mg/L）、KT（1.0 mg/L）、TDZ（1.0 mg/L）的不同种类与浓度植物激素组合的MS培养基上，培养周期为30 d，通过统计和对比诱导效率以及生长状况，研究不同激素种类与浓度组合对暗紫贝母鳞茎诱导的影响。 　　1.2.3 继代培养的选择 选用鳞茎诱导出的不定芽，转移到含有NAA（0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L）、6-BA（0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L）的MS培养基中，每种培养基30块，培养30 d后观察记录，比较NAA、6-BA对其继代生长的影响。 　　1.2.4 暗紫贝母鳞茎诱导生根培养 选取生长较一致且健壮、未生根的绿色鳞芽单株，转入含NAA（0.5、2.0 mg/L）、IBA（0.5 mg/L）、6-BA（0.5、2.0 mg/L）、KT（1.0 mg/L）、TDZ（1.0 mgl/L）的1/2MS、MS生根培养基中，培养30 d后统计生根数、出根率