抗冻基因kn2表达载体的构建及大麦遗传转化的研究8bx8rqj2.doc

分类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 抗冻基因表达载体的构建及大麦遗传转化研究 研究生:万萌 学 号: 指导教师:孙东发教授 指导小组:孙东发教授 孙根楼教授 专 业:作物遗传育种 研究方向:麦作遗传育种 获得学位名称:农学硕士 获得学位时间:年月 华中农业大学植物科学技术学院 二。一三年六月华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 如需保密,解密时间 年 月 日 是否保密 雷 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果.尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意。 蝴:矽弓年乡月弓日 研究生签名:汤鲡 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定,即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印制版和电子版, 并提供目录检索和阅览服务,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容,为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务,同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注:保密学位论文即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文在解密后适用予本授权书. 四黼张乃翻 翩始参欢 签名日期:劢心年易月弓日 签名日期:凇乃年么月岁日 注:请将本表壹接装订在学位论文的扉页和目录之间抗冻基因表达载体的构建及遗传转化研究 目录 摘 要??..??.??. 第一章文献综述. 大麦遗传转化技术研究现状与进展?. .大麦的遗传转化方法 ..基因枪转化法?. ..电穿孔? ..显微注射??.. ..花粉管通道法? ..农杆菌介导法? .转基因技术在大麦研究中的应用? ..大麦抗病害研究 ..环境胁迫抗性应用??. ..大麦品质改良应用??. 植物抗冻基因工程研究进展?. .抗冻基因的来源.抗冻基因的应用..抗冻蛋白基因?. ..脯氨酸基因??. ..脂肪酸去饱和酶基因? ..超氧化物歧化酶基因? 研究的目的意义 第二章大麦幼胚再生体系的建立材料和方法.材料.. .培养基??. 大麦愈伤组织的诱导、继代培养、分化及植株再生华中农业大学届硕士学位毕业论文 结果统计及分析 .统计方法?.. .幼胚愈伤组织的诱导与再生??. .不同基因型对幼胚愈伤组织诱导及分化的影响.. . 对幼胚愈伤组织诱导的影响. 第三章基因表达载体的构建与遗传转化 实验材料与方法. .材料?.. .实验方法.. 基因表达载体的构建... 基因表达载体构建策略?..... ... 引物设计与反应条件. ...割胶回收目的片段. ... 载体的连接??.. ... 法制备大肠杆菌感受态细胞...质粒向大肠杆菌的转化? ...测序??.. ...质粒提取:. ...质粒酶切与连接?. ... .载体的构建..农杆菌介导的大麦遗传转化? ...大麦组织培养过程中的培养基制备...电转化农杆菌感受态细胞的制备. ...质粒转化农杆菌?. ...农杆菌标准培养物的制备. ...侵染和共培养??. ..筛选培养和植株再生...转基因大麦植株检测 结果与分析??抗冻基因表达载体的构建及遗传转化研究 . 基因表达载体的构建. .. 基因的扩增与载体连接??.. ..表达载体 的构建向农杆菌的转化?.. ..表达载体 .农杆菌介导的遗传转化?. ..农杆菌介导幼胚的转化及植株再生.. ..转基因大麦植株检测?. 第四章讨论大麦幼胚再生体系的建立表达载体构建中的影响因素? 农杆菌介导的遗传转化 参考文献? 附录:缩略语表 附录:常用培养基及其它试剂和抗生素母液配方? 附录:基因编码序列致射. 抗冻基因表达载体的构建及遗传转化研究 摘要 大麦 .是世界重要的粮食作物,在全球范围内广泛种植,是 啤酒和饲料的主要原料。经过近十年的发展,大麦基因工程研究得到了广泛的应用, 在大麦品质改良、抗病研究和抗胁迫等领域获得了很多具有积极意义的成果。近年 来,全球气候变化无常,自然灾害频繁发生,其中冻害已经对大麦的生产造成了严 重的影响,随着转基因技术的发展,将优良的外源抗冻基因转化到大麦中去,可显 著提高大麦的抗冻性。本研究以不同大麦品种为材料建立了大麦幼胚再生体系,构 建了高效的抗冻基因表达载体,并且对其进行了遗传转化研究。得到的研究 结果如下: 以个大麦品种美里黄金,,华大麦号,华大麦号 的幼胚为试验材料,建立了