标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等.pptVIP

标准菌株的管理 标准菌株管理-目录 及 1 标准菌株概念及其应用 2 标准菌种管理的相关流程 3 实验室常用菌种保存方法 一、标准菌株的概念及其应用 1.1标准菌株概念 1）GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范食品微生物检测: 1、标准培养物：标准菌株、标准储备菌株和工作菌株的统称。 2、标准菌株：至少定义至属或种水平的菌株。按其特征进行分类和 描述，有明确的来源。 3、标准储备菌株：标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。 4、工作菌株：由标准储备转接后获得的同种菌株。 1.2标准菌株的应用： 各种国际标准、国家标准、行业标准及企业标准等的相关微生物检测， 用于验收培养基(包括试剂盒)、验证方法和评估实验操作。 二、微生物菌种管理的相关流程 2.1菌株的采集：实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。 2.2标准菌株和验收 实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。 2.3冻干标准菌株的复活 2..3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株接收、保存记录序号前面。 二、微生物菌种管理的相关流程 2.3.2复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则见 附录）进行复活。菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠菌胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。 二、微生物菌种管理的相关流程 附录 方法? ? ? ? 培养基 方法1? 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)，非选择性羊血琼脂，PCA或营养 琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。 方法2? ? ? ? 非选择性羊血琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。 方法3? ? ? ? 巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养24-48小时。 方法4? ? ? ? CDC厌氧血琼脂35℃厌氧培养48-72小时；部分专性厌氧菌可 能需要5-7天，才能充分生长；对于梭菌，以下新鲜培养基也可选 用：营养琼脂，TSA琼脂，PCA琼脂，需培养48-96小时。 方法5? ? ? ? 沙堡氏葡萄糖Emmons琼脂25-28℃培养3-7天；也可用PDA琼脂。 二、微生物菌种管理的相关流程 方法6? ? ? ? 巧克力琼脂平板，35℃微需氧环境培养48-72小时。 方法7? ? ? ? 改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂，35℃5-10%CO2或正常环境 培养7天。 方法8? ? ? ? 缓冲活性碳酵母提取物琼脂，35℃正常环境培养3-5天。 方法9? ? ? ?巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养48小时。 方法10? ? ? 先用脑心浸出液肉汤或TSB培养基35℃增菌培养18-24小时， 再划线至TSA琼脂35℃正常环境培养24-48小时。 方法11? ? ? 先接种于MRS肉汤35℃增菌培养24-48小时，再划线接种至含 羊血的哥伦比亚CNA培养基35℃5%CO2环境培养24-48小时。 方法12? ? ? ?PDA琼脂45℃正常环境培养48-72小时。 方法