大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范 征求意见稿.docVIP

ICS FORMTEXT FORMTEXT 点击此处添加中国标准文献分类号 FORMTEXT FORMTEXT SN 中华人民共和国 FORMTEXT 出入境检验检疫行业标准 FORMTEXT SN/T FORMTEXT 2124— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范 FORMTEXT Protocol of quarantine for Gyrodactylus salaris of Atlantic salmon FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 SN/T 2124—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT I 前言 本标准参考了国际动物卫生组织（OIE）编写的水生动物疾病诊断手册（2010版）中2.3.3 Gyrodactylosis（Gyrodactylus salaris）的有关章节，并结合了相关国内外的文献资料报道以及起草单位多年的检疫方法研究。 本标准的附录B为规范性附录，附录A、附录C、附录D和附录E为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：中国检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局、山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：吴绍强、林祥梅、王彩霞、刘荭、岳志芹、贾广乐、刘建、张永宁、张旻、吕继洲。 本标准为修订出入境检验检疫行业标准。 大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范 范围 本标准规定了三代虫检疫时的样品采集、形态学、PCR初筛以及大西洋鲑鱼三代虫特异的聚合酶链反应（PCR）检测方法。 本标准适用于大西洋鲑鱼三代虫的口岸检测、监测以及养殖场流行病学调查使用。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 SN/T 1193 基因分析检测实验室技术要求 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 鲑鱼三代虫 Gyrodactylus salaris 鲑鱼三代虫隶属于单殖亚纲三代虫科，主要感染2龄以内野生和养殖鲑鱼。它还能感染其它的鲑鳟鱼类，如虹鳟、北极红点鲑、溪红点鲑、鮰鱼、湖红点鲑和鳟鱼（按易感性从强到弱排列）。 概述 大西洋鲑鱼三代虫简介参见附录A。 材料 除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。试验用水要求达到GB/T 6682中一级水的要求。 APG溶液：配制方法见附录B.1。 裂解液：配制方法见附录B.2。 PCR buffer、dNTP（2.5mmol/L或10mmol/L）、DNA聚合酶、DNA Marker、电泳上样缓冲液等，均为商品化试剂盒中成份。 电泳缓冲液：配制方法见附录B.3。 无水乙醇 琼脂糖 设备 超净台 解剖镜 生物显微镜 通风操作台 PCR仪 电泳仪 凝胶成像仪或紫外透射仪 -20℃冰箱、4 高速冷冻离心机 高压灭菌锅 微量移液器及配套的吸头 检测方法 采样及固定 在实验室中检查三代虫时，必须采集活鱼并放在原生活的水中运输，且一个容器只装运一种鱼。在冰中运输的死鱼不适于作三代虫的检查。 不能进行活鱼检查时，可以用甲醛固定鱼或用酒精处理鱼后进行检查。采用甲醛固定鱼时，放入鱼之前甲醛的浓度应在8%~10%（相当于20%~25%的福尔马林），因为固定过程中有水从鱼体中释放出来，因此固定鱼后甲醛的浓度应不低于4%（相当于10%的福尔马林）。采用酒精处理鱼时，建议酒精的浓度在80%~85%之间为宜，处理鱼后酒精的浓度应保持在大约70%。固定鱼的标本瓶应相对较大，以使其有足够的空间放固定液并留有余地（5~10倍），且瓶口要大，以防在取出鱼检查时可能刮掉三代虫。固定鱼时，瓶子应该放平，固定2~3天后将瓶子回到垂直位置。 在监测三代虫标本时，甲醛固定的鱼通常比酒精固定的鱼要好一些，因为使用甲醛固定后，寄生虫的颜色变得更白一些，更容易检查到。 形态学检查 活鱼的检查 采用针刺鱼脑杀死鱼。将鱼放在盛有运输时所用水的容器中，水应完全淹没鱼体。 采用双筒解剖镜对活鱼逐条检查。检查时，避免折射光线在鱼体表的干扰。 当采用解剖镜上光源进行检查时，容器底部应为黑色，以增加反差便于寄生虫的监测。 检查整个鱼体表，包括鳃和口腔，使用两把镊子